[發(fā)明專利]一種小桐子毒蛋白的連續(xù)化提取方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910094015.8
• 申請日: 2009-01-08
• 公開（公告）號: CN101463073A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧欣;方真;楊成源;張紹志;劉云虎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院西雙版納熱帶植物園
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C11B3/00;C11B1/00
• 代理公司: 云南協(xié)立專利事務(wù)所
• 代理人: 謝 嘉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于毒蛋白提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以小桐子為原料連續(xù)化提取毒蛋白的方法。

背景技術(shù)

小桐子(Jatropha?curcas?L.)，又名麻瘋樹、黃腫樹、假花生、芙蓉樹、亮桐、南洋油桐，屬大戟科(Euphorbiaceae)麻瘋樹屬植物，主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)如云南、貴州、四川、廣西、廣東等。小桐子核糖體失活蛋白(Curcin)是小桐子種仁中一種毒蛋白，又稱小桐子毒蛋白。小桐子毒蛋白在生物農(nóng)藥、醫(yī)藥方面具有廣闊的應(yīng)用前景，目前已受到廣泛關(guān)注。因此，小桐子毒蛋白的提取純化具有重要意義。如何提高小桐子毒蛋白提取率及純度，并用于大規(guī)模生產(chǎn)之中，是國內(nèi)外專家正在進行的一項重要研究。

目前提取純化小桐子毒蛋白的方法主要有：①葡聚糖凝膠柱層析純化法：黃德如等采用磷酸鹽緩沖液提取，硫酸銨鹽析及葡聚糖凝膠G-100柱層析后得小桐子毒蛋白。②聚氨酯功能泡沫塑料粉末柱層析純化法：梁渠等采用丙酮脫脂，磷酸鹽緩沖液提取，功能泡塑填料柱層析后得到小桐子毒蛋白.③專利CN?1714863A公開了一種麻瘋樹毒蛋白提取方法及其用途，采用勻漿、攪拌、透析、凝膠柱層析得到毒蛋白。但上述方法均存在毒蛋白提取率不高，柱層析只能得到少量毒蛋白等問題，無法滿足大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提取時間短、效率?高、可大規(guī)模連續(xù)化生產(chǎn)小桐子毒蛋白的提取工藝。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。

一種小桐子毒蛋白的連續(xù)化提取工藝，其特征在于：小桐子種仁經(jīng)粉碎、超聲提取、離心分離脫脂、等電點沉淀、膜分離純化、再次等電點沉淀和再次膜分離純化后得到高純度毒蛋白溶液。

具體包括以下步驟：

1、粉碎：小桐子種子經(jīng)粗破后，將種仁粉碎至粒度200～1000目；

2、超聲提取：將粉碎好的種仁粉末與濃度0.1～1mol/L的磷酸鹽緩沖液以體積比1∶5～1∶20均勻混合后超聲提取，超聲頻率20～80KHz，超聲時間20～60min，攪拌速率0～500rpm；

3、離心分離脫脂：將提取液輸送到離心機，離心速率1000～4000rpm，離心10～30min，將油脂層轉(zhuǎn)入油脂貯存罐，分離上清液和沉淀物；

4、等電點沉淀：上清液中加入濃度0.1～1mol/L的磷酸鹽緩沖液，調(diào)節(jié)上清液pH值為7.0～9.0，沉降10～24h，膜分離脫鹽，得粗蛋白濃縮液；

5、膜分離純化：先采用截流分子量4萬的生物膜除去4萬以上的大分子蛋白，再使用截流分子量1萬的生物膜除去1萬以下的蛋白質(zhì)，超濾壓力差0.2～0.6MPa，料液濃度2～8％，得濃縮液；

6、所得濃縮液再重復步驟(4)和(5)，經(jīng)等電點沉淀和膜分離純化后得到高純度毒蛋白溶液。

步驟(3)中，離心分離得到的沉淀物再次進行超聲提取和離心分離脫脂，所得到的上清液和沉淀物分別與第一次分離得到的上清液和沉淀物合并；

所述的離心分離得到的沉淀物以丙酮為溶劑，經(jīng)超聲波提取得到小桐子油。

提取了小桐子油后的沉淀物殘渣作為動物飼料或肥料。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點：

1.超聲波提取小桐子毒蛋白，提取時間短，能耗低，提取效率高；

2.膜分離脫鹽濃縮效率高，可顯著降低成本；

3.等電點鹽析和膜分離純化相結(jié)合，提取的毒蛋白純度高；

4.該方法可工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)。

附圖說明

附圖為本發(fā)明小桐子毒蛋白提取工藝的流程示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做進一步說明，但它們不是對本發(fā)明的限定。

實施例1