[發明專利]一種透明質酸的提取方法

有效

• 申請號: 200910093777.6
• 申請日: 2009-09-28
• 公開（公告）號: CN101704905A
• 公開（公告）日: 2010-05-12
• 發明（設計）人: 李榮杰;尚海濤;崔剛;潘聲龍
• 申請（專利權）人: 安徽豐原發酵技術工程研究有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

技術領域

本發明涉及一種從透明質酸發酵液中分離提取透明質酸的方法。

背景技術

透明質酸(Hyaluronic?Acid，HA)又名玻尿酸，是一種酸性粘多 糖，以其獨特的分子結構和理化性質在機體內顯示出多種重要的生理 功能，如潤滑關節，調節血管壁的通透性，調節蛋白質，水電解質擴 散及運轉，促進創傷愈合等。尤為重要的是，它具有特殊的保水作用， 是目前發現的自然界中保濕性最好的物質，被稱為理想的天然保濕因 子。它可以改善皮膚營養代謝，使皮膚柔嫩、光滑、去皺、增加彈性、 防止衰老，在保濕的同時又是良好的透皮吸收促進劑，與其他營養成 分配合使用，可以起到促進營養吸收的更理想效果。

近年來，透明質酸在各個領域應用日益廣泛，如化妝品和保健食 品、關節疾病治療、給藥體系中的應用、眼科治療中的應用等。

目前從透明質酸發酵液中提取透明質酸的方法主要是酒精沉淀 法，只是后續處理有所差異。比如，先將透明質酸發酵液由乙醇分離 得到透明質酸提取物，然后向提取物中加入由4.2g/L碳酸氫鈉和5.3 g/L碳酸鈉以體積比為45∶5組成的水溶液及胰蛋白酶進行水解。水解后 所得分離物在磷酸二氫鈉含量為0.45g/L，磷酸氫二鈉含量為0.05g/L 及氯化鈉含量為11.6g/L的水溶液中溶解，向其中加入3倍體積的95％ 乙醇，得到沉淀，絕干的沉淀物中透明質酸質量比為98.9％。隨后， 經活性炭以及透析處理。最終透明質酸質量比為99.996％，相對分子 量58萬Da。但該法得到的透明質酸產品相對分子量小，操作繁瑣，且 成本較高，不利于工業化生產。

和其他生物工程產品一樣，透明質酸工業生產也常常會受到生產 成本的制約，而在生產成本的構成中，分離提取等下游工程的成本占 有相當的比例。因此，研究透明質酸的提取方法具有重要的理論意義 和實用價值。

發明內容

本發明的目的是提供一種從透明質酸發酵液中分離提取透明質 酸的方法，該方法具有提取收率高，產品純度高，對環境的污染小等 優點。

為了實現本發明目的，本發明的一種透明質酸的提取方法，包括 如下步驟：

1)先將透明質酸發酵液調pH為4.0～6.0，再加入絮凝劑絮凝后， 經過濾得透明質酸清液；

2)然后將透明質酸清液經脫色、調pH6.0～6.5，再經乙醇沉淀；

3)將乙醇沉淀物溶解后，再加絡合劑進行絡合沉淀，沉淀物用 鹽解離，過濾，濾液再經乙醇沉淀，最后沉淀物經脫水、干燥。

其中，所述透明質酸發酵液來自鏈球菌有氧發酵生產的發酵液， 到發酵末期直接放罐進行下游提取。

步驟1)中調pH多采用三氯乙酸。三氯乙酸在pH4.0～6.0的情況下 可使蛋白質變性，從而達到滅活透明質酸酶的作用，防止透明質酸分 子量損失。

所述絮凝劑為聚丙烯酰胺，選用的絮凝劑型號為A856或A656。 其添加量為10～30ppm/L，絮凝溫度為50～90℃，絮凝時間為30～60min。

所述過濾采用板框過濾方式。也可用真空抽濾的過濾方式，但由 于透明質酸發酵液較粘稠，真空抽濾太慢，一般不予采用。

步驟2)中所述脫色采用活性炭進行脫色，一般添加量為5～8g/L， 脫色溫度為60～80℃，脫色時間為30～60min。

步驟2)中采用氫氧化鈉調pH6.0～6.5，氫氧化鈉溶液濃度為 1.25～2.5mol/L。

乙醇沉淀采用95％乙醇，其用量為被處理液體積的2～4倍。

步驟3)中乙醇沉淀物采用鹽溶液溶解，比如0.1mol/L氯化鈉溶 液，其用量為發酵液等體積。

所述絡合劑為氯代十六烷基吡啶(CPC)水溶液，其中，CPC水 溶液濃度為5～15g/L。

所述沉淀物用鹽解離時，先需要采用0.1mol/L氯化鈉溶液洗滌 2～3次，然后再與發酵液等體積的0.5mol/L氯化鈉溶液中攪拌解離 15～20小時。

鹽解離后采用真空抽濾方式進行過濾。

過濾后采用濾液3～4倍體積的乙醇沉淀2～4小時，所述乙醇采用 95％的乙醇。

所述脫水采用無水乙醇脫水。

所述干燥采用真空干燥，干燥溫度為40～60℃，干燥時間2～4小時。