[發明專利]一種篩選不同亞型單克隆抗體的方法

有效

• 申請號: 200910093730.X
• 申請日: 2009-10-15
• 公開（公告）號: CN102043051A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 趙懷璞
• 申請（專利權）人: 中國輻射防護研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 北京天悅專利代理事務所(普通合伙) 11311
• 代理人: 田明;任曉航

1.一種篩選不同亞型單克隆抗體的方法，包括如下步驟：

(1)取細胞融合后所形成的雜交瘤細胞的培養上清液，離心去除懸浮的細胞及細胞碎片，獲得培養上清液A；

(2)將適量上清液A加入帶有濾膜的孔板，離心收集透過液B；

(3)將孔板翻轉后，加入洗脫液再次離心，使濾膜截留的組分充分洗脫，并收集截留組分溶液C；

(4)將孔板的各孔所對應的A、B、C液分別加入使用免疫原包被的抗原板孵育，根據免疫動物選擇相應的酶標二抗，進行ELISA試驗；

(5)根據試驗結果以及期望獲得的抗體類型，確定對哪一孔細胞進行克隆化培養。

2.如權利要求1所述的篩選不同亞型單克隆抗體的方法，其特征在于：在步驟(2)中，所述的濾膜能夠截留的分子量在150kD～900kD之間。

3.如權利要求2所述的篩選不同亞型單克隆抗體的方法，其特征在于：在步驟(2)中，所使用的孔板規格為96孔、48孔或24孔。

4.如權利要求1所述的篩選不同亞型單克隆抗體的方法，其特征在于：在步驟(3)中，所用的洗脫液為0.01mol/L?PBS溶液。

5.如權利要求1或2或3或4所述的篩選不同亞型單克隆抗體的方法，其特征在于：在步驟(4)中，ELISA試驗的結果若A、B液呈現陽性，則該孔細胞分泌抗體類型為IgG；若A、C液呈現陽性，則該孔細胞分泌抗體類型為IgM；若A、B、C液均呈現陽性，則該孔細胞同時含有分泌IgG和IgM類型抗體的雜交瘤細胞。