[發明專利]甲烷氧化混合菌的保存方法

無效

• 申請號: 200910092357.6
• 申請日: 2009-09-07
• 公開（公告）號: CN101638631A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發明（設計）人: 邢新會;江皓;楊程;韓冰;吳昊;張翀
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/26;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

1.一種甲烷氧化混合菌的保存方法，包括將甲烷氧化混合菌菌體置于-70℃～-80℃凍存的步驟；

每個保存容器中，所述甲烷氧化混合菌菌體的濕重為50mg以上；

所述甲烷氧化混合菌的制備方法包括如下步驟：

1)采集煤礦或垃圾填埋場的土樣；

2)將步驟1)的土樣加入NMS培養基中，于密封瓶中培養；初始時，所述密封瓶中，NMS培養基、甲烷和空氣的體積比為5∶(2.5-3.5)∶(15-18)；每24-72小時向密封瓶中置換入甲烷，使所述密封瓶中，NMS培養基、甲烷和空氣的體積比為5∶(2.5-3.5)∶(15-18)；

3)每8-12天接種步驟2)的培養液至新的NMS培養基，進行傳代；步驟2)的培養液與NMS培養基的體積比為(5-15)∶(95-85)；傳至第10代，得到甲烷氧化混合菌；

所述NMS培養基配制方法如下：將100ml溶液A和1ml溶液B混合并用水定容至1L，滅菌后加入10ml滅菌后的溶液C，得到NMS培養基；每升所述溶液A的配制方法為：將KNO₃10g，MgSO₄·7H₂O?10g，CaCl₂·2H₂O?2g，水定容至1L；每升所述溶液B的配制方法為：Fe-EDTA?0.38g，NaMoO₄0.26g，FeSO₄0.5g，MnCl₂·4H₂O?0.02g，CoCl₂·6H₂O?0.05g，H₃BO₃0.015g，Na-EDTA?0.25g，ZnSO₄·7H₂O?0.4g，NiCl₂·6H₂O?0.01g，CuSO₄·5H₂O?0.025g，水定容至1L；每升所述溶液C的配制方法為：Na₂HPO₄·12H₂O?71.6g，KH₂PO₄26g，水定容至1L，pH值調至6.8。