[發(fā)明專利]一種抗持留狀態(tài)結核分枝桿菌的藥物篩選方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910092166.X
• 申請日: 2009-09-03
• 公開（公告）號: CN101643774A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發(fā)明（設計）人: 余利巖;邵天舒;岑山;黃彬;張玉琴
• 申請（專利權）人: 中國醫(yī)學科學院醫(yī)藥生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/32;G01N21/33;A61K45/00;A61P31/06
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司
• 代理人: 王朋飛

1、一種篩選抗持留狀態(tài)結核分枝桿菌藥物的方法，其特征在于，將待測樣品與PknG接觸，篩選能夠抑制PknG活性的待測樣品，即為抗持留狀態(tài)結核分枝桿菌的藥物。

2、如權利要求1所述的方法，其特征在于，將待測樣品適當稀釋后加入到如下反應體系中作為樣品實驗組：

反應物??????????????終濃度

Hepes???????????????50～150mM

ATP?????????????????25～75mM

PEP?????????????????0.5～1.5mM

NADH????????????????0.5～1.5mM

PknG????????????????1～3μg/100μl

丙酮酸激酶??????????0.5～1.5U/100μl

乳酸脫氫酶??????????0.5～1.5U/100μl

同時以不添加待測樣品組作為陰性對照，與陰性對照組相比單位時間內(nèi)OD₃₄₀值的變化越小，則對PknG的抑制率越高。

3、如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述反應體系如下：

反應物??????????????終濃度

Hepes???????????????100mM

ATP?????????????????50mM

PEP?????????????????1mM

NADH????????????????1mM

PknG????????????????2μg/100μl

丙酮酸激酶??????????1U/100μl

乳酸脫氫酶??????????1U/100μl。

4、如權利要求2或3所述的方法，其特征在于，其還設置有陽性對照組，所述陽性對照組以等體積的ddH₂O代替反應體系中的PknG，抑制率設為100％，待測樣品對PknG的抑制率的計算方法是：

抑制率IR=ΔN-ΔSΔN-ΔP×100%,]]>

其中，ΔN是陰性對照孔平均每分鐘吸光值的變化量；ΔP是陽性對照孔平均每分鐘吸光值的變化量；ΔS是樣品孔平均每分鐘吸光值的變化量。

5、如權利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述待測樣品的終濃度為25～75mg/ml。

6、一種抗持留狀態(tài)結核分枝桿菌的藥物，其含有按照權利要求1～5任一所述方法篩選得到的PknG抑制劑。