[發明專利]一種產L-蘋果酸的基因工程菌及其構建方法和應用有效
| 申請號： | 200910092043.6 | 申請日： | 2009-09-07 |
| 公開（公告）號： | CN101649300A | 公開（公告）日： | 2010-02-17 |
| 發明（設計）人： | 李榮杰;徐斌;薛培儉;段緒果 | 申請（專利權）人： | 安徽豐原發酵技術工程研究有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/21;C12N15/01;C12N15/76;C12N15/70;C12N15/74;C12P7/46;C12R1/19;C12R1/01 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蘋果酸 基因工程 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種產L-蘋果酸的基因工程菌，其出發菌為產琥珀酸的菌，其特征在于，所述菌株的富馬酸酶基因突變，不具備富馬酸酶活性，該突變是富馬酸酶基因替換為蘋果酸脫氫酶表達盒。
2.如權利要求1所述的產L-蘋果酸的基因工程菌，其特征在于，所述蘋果酸脫氫酶表達盒是由該菌內源性啟動子與蘋果酸脫氫酶基因構成。
3.如權利要求2所述的產L-蘋果酸的基因工程菌，其特征在于，所述內源性啟動子為磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的啟動子。
4.如權利要求1～3任一項所述的產L-蘋果酸的基因工程菌，其特征在于，所述出發菌為產琥珀酸的放線菌。
5.如權利要求4所述的產L-蘋果酸的基因工程菌，其特征在于所述出發菌為抗單氟乙酸鈉產琥珀酸的放線菌。
6.一種構建權利要求1～5任一所述產L-蘋果酸的基因工程菌的方法，其包括構建富馬酸酶基因打靶載體，導入出發菌，使富馬酸酶基因產生滅活性突變，所述滅活性突變是將富馬酸酶基因替換為蘋果酸脫氫酶表達盒。
7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述蘋果酸脫氫酶表達盒是由該菌內源性啟動子與蘋果酸脫氫酶基因構成。
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述內源性啟動子為磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的啟動子。
9.權利要求1～5任一項所述基因工程菌在制備L-蘋果酸中的應用。
10.一種制備L-蘋果酸的方法，其以權利要求1～5任一項所述基因工程菌進行發酵生產L-蘋果酸。
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