[發(fā)明專利]禽流感合成肽疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910091463.2
• 申請日: 2009-08-21
• 公開（公告）號: CN101628932A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 齊鵬;郭麗清;肖進(jìn);李丙首;巴利民;宋芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中牧實業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/11
• 分類號: C07K14/11;A61K39/145;A61P31/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 曹津燕

1.一種用于禽流感合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列如 SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示。

2.一種用于禽流感合成肽疫苗的多肽聚合物，其含有權(quán)利要求1所述 SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列，所述多肽聚合物的氨基酸序列如(SEQ?ID NO.1)₂-K-εK-CONH₂所示，其中K代表賴氨酸，ε代表在ε氨基有Fmoc保 護(hù)的賴氨酸。

3.一種禽流感合成肽疫苗，其中包含權(quán)利要求1所述的多肽或權(quán)利要求 2所述的多肽聚合物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐劑。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1中所述的多肽的制備方法，其中包括以下步驟：

(1)去保護(hù)反應(yīng)：在體積百分比為15％-30％的六氫吡啶的N-甲基吡咯 烷酮溶液中，在20-28℃條件下反應(yīng)25-40分鐘，脫除樹脂氨基上的9-芴甲 氧羰基保護(hù)基團(tuán)，氮氣吹干，N-甲基吡咯烷酮洗滌；

(2)氨基酸的活化：將合成用的帶有9-芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)的各個氨 基酸與1-羥基苯丙三唑反應(yīng)合成氨基酸-1-羥基苯丙三唑酯；

(3)縮合反應(yīng)：使用多肽合成儀將步驟(2)中獲得的活化的氨基酸和 步驟(1)中獲得的去保護(hù)反應(yīng)后的樹脂以及二異丙基碳二亞胺自動加至反 應(yīng)器中，在20-28℃條件下反應(yīng)0.5-2.5小時，氮氣吹干，N-甲基吡咯烷酮洗 滌樹脂；

(4)乙酰化反應(yīng)：使用重量體積百分比為1.5％-4％的乙酰咪唑的N-甲 基吡咯烷酮溶液與步驟(3)中獲得的樹脂在20-28℃條件下反應(yīng)20-40分鐘， 氮氣吹干，甲醇洗滌樹脂；

(5)合成過程由C端至N端，依照氨基酸序列不斷的重復(fù)步驟(1)- (4)，反應(yīng)完成后，用N-甲基吡咯烷酮清洗，得到干燥的多肽樹脂；

(6)多肽與樹脂的分離：向干燥的多肽樹脂中加入裂解試劑，所述裂 解試劑的組分體積比為三氟乙酸∶三異丙基硅烷∶乙二硫醇∶苯酚∶水＝85∶ 8∶3∶3∶1；勻速攪拌1-4小時后置于0℃下反應(yīng)10分鐘，恢復(fù)至室溫，揮 去三氟乙酸，將叔丁基甲醚及二乙醚加入多肽溶液，攪拌洗滌，過濾得多肽 溶液；

(7)超濾純化多肽及無菌處理：使用膜包在20-28℃條件下超濾多肽， 使用0.22微米在線濾器除菌保存。

6.一種根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的疫苗的制備方法，其中包括以下步驟：

(1)用注射用水將多肽或其多肽聚合物稀釋至50μg/ml制得多肽或其 多肽聚合物溶液；

(2)在20-28℃條件下，按照多肽或其多肽聚合物溶液∶佐劑＝1∶1 的體積比，先將佐劑加入乳化罐內(nèi)，90-150轉(zhuǎn)/分鐘慢速攪拌1.5-3分鐘；

(3)緩慢加入多肽或其多肽聚合物溶液，攪拌20-30分鐘；

(4)高速攪拌15-30分鐘后靜置5分鐘，分裝后即得，所述高速攪拌 為8000-10000轉(zhuǎn)/分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的多肽或權(quán)利要求2所述的多肽聚合物在制備 預(yù)防和/或治療H9亞型禽流感的藥物中的用途。

8.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的疫苗在制備預(yù)防和/或治療H9亞型禽流感的 藥物中的用途。