[發明專利]勻相溶膠顆粒型胱抑素C測定試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 200910090689.0
• 申請日: 2009-09-08
• 公開（公告）號: CN101699287A
• 公開（公告）日: 2010-04-28
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: G01N33/538
• 分類號: G01N33/538;G01N33/542
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

技術領域

本發明涉及一種勻相溶膠顆粒型免疫測定試劑盒及其制備方法，更具體 地，涉及用于測定血清或血漿中胱抑素C的勻相溶膠顆粒型胱抑素C免疫測 定試劑盒及其制備方法。

背景技術

胱抑素C(CystatinC)是一種低分子量蛋白質，可由機體所有有核細胞產生， 產生率恒定。循環中的胱抑素C僅經腎小球濾過而被清除，是一種反映腎小 球濾過率變化的理想的內源性標志物，而腎小球的濾過率(glomerular?filtration rate，GFR)是監測腎功能的一個重要指標，尤其對于腎移植的病人，快速準確 的掌握腎小球濾過率的變化是十分重要的。此外由于胱抑素C分子量大于肌 酐，且帶正電荷，所以它更容易反映腎小球濾過膜通透性的早期變化，可以在 腎小球濾過率輕微降低時升高，較肌酐更敏感，作為腎功能試驗優于血清肌酐， 具有重要的臨床應用價值。

胱抑素C，是一種由120個氨基酸殘基組成的分子量僅13KD的低分子量 分泌性蛋白質，是半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族的成員之一。胱抑素C基因5’ 側翼序列與“看家基因″的啟動子區具有相同的特性，也屬于“看家基因”即 此基因在所有組織恒定持續地轉錄及表達，無組織學特異性，廣泛地存在于各 種體液中，如腦脊液、血液、唾液、精液等，機體胱抑素C產生率相當恒定。 而胱抑素C是一種低分子量蛋白質，可經腎小球自由濾過，腎臟是清除循環 中胱抑素C的唯一器官，所以血清胱抑素C濃度主要由GFR決定，由此可見 胱抑素C是一種理想的反映GFR變化的內源性標志物。

臨床研究低分子量蛋白質(β2-微球蛋白、視黃醇結合蛋白、胱抑素C)濃度 與GFR(⁵¹Cr-EDTA清除率或其金標準^99mTc-DTPA清除率)的相關性，血清胱 抑素C、肌酐濃度診斷異常GFR的敏感性分別為78.1％及57.1％，各自濃度 倒數與GFR(⁵¹Cr-EDTA清除率)的相關系數分別為：0.81和0.50(參見非專利 文獻1)。表明胱抑素C是低分子量蛋白質中與GFR最相關的內源性標志物， 甚至優于血清肌酐。血清β2-微球蛋白濃度由于在炎癥、腫瘤及免疫疾病時也 可升高，故不是理想的GFR內源性標志物。而胱抑素C即使在炎癥狀態下， 其產生率也不會改變，血清濃度受年齡、性別、疾病的病情變化的影響較小。 說明胱抑素C的診斷準確性明顯優于血清肌酐。

胱抑素C的檢測方法學經歷了大概4個階段的發展過程，從最初的單向 免疫擴散到酶免疫測定，再到后來的膠乳增強法及勻相溶膠顆粒法等，幾種方 法都屬于免疫檢測法。免疫濁度測定的基本原理是：抗原抗體在特殊緩沖液中 快速形成抗原抗體復合物，使反應液出現濁度。當反應液中保持抗體過量時， 形成的復合物隨抗原量增加而增加，反應液的濁度亦隨之增加，與一系列的標 準品對照，即可計算出待檢測物的含量。但含量低分子量小的抗原抗體復合物 極難形成濁度，除非放置較長時間；如形成較大的復合物，則抗原和抗體用量 也較大，顯然不符合微量化的要求。于是發展了免疫膠乳濁度測定法，是在膠 乳凝集定性試驗基礎上發展建立的一種非放射性均相免疫濁度測定法，其基本 原理是：將抗體吸附在大小適中、均勻一致的膠乳顆粒上，當遇到相應抗原時， 則使膠乳顆粒發生凝集。單個膠乳顆粒在入射光波之內不阻礙光線透過，兩個 或兩個以上膠乳顆粒凝聚時則使透過光減少，這種減少的程度與膠乳顆粒凝聚 的程度呈正比，當然也與待測抗原量呈正比，由此可測出標本中待測物的含量。 這種方法會產生免疫沉淀。后來又出現了勻相溶膠顆粒免疫測定法，其基本原 理是：將抗體吸附在大小適中、均勻一致的膠體金顆粒上，當遇到相應抗原時， 由于抗原抗體的相互作用使吸附抗體的膠體金顆粒發生凝聚。金顆粒凝聚后顏 色由紅變藍，在波長540nm處吸光度會逐漸降低。而這種降低的程度與膠體 金顆粒凝聚的程度呈正比，當然也與待測抗原量呈正比，由此可測出標本中待 測物的含量。但是，目前的勻相溶膠顆粒免疫測定法，其分析靈敏度還不令人 滿意，期待著進一步提高該方法的檢測靈敏度。