[發明專利]3α-羥基類固醇脫氫酶及其核苷酸序列、重組載體、重組宿主細胞和試劑盒

有效

• 申請號: 200910090688.6
• 申請日: 2009-09-08
• 公開（公告）號: CN101698834A
• 公開（公告）日: 2010-04-28
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/53;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;C12Q1/32;C12Q1/68;C12R1/40;C12R1/19
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

1.一種3α-羥基類固醇脫氫酶，其特征在于，所述3α-羥基類固醇脫氫 酶的氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列。

2.一種編碼3α-羥基類固醇脫氫酶的核苷酸序列，其特征在于，所述核 苷酸序列為編碼權利要求1所述的3α-羥基類固醇脫氫酶的核苷酸序列。

3.根據權利要求2所述的核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列為

(1)SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列；或者

(2)對SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列進行一個或幾個核苷酸取代而 得到的密碼子同義突變的核苷酸序列。

4.根據權利要求3所述的核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列為

(1)SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列；或者

(2)SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列。

5.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體由空載體和插入該空載體 的目的基因組成，所述目的基因為權利要求2-3中任意一項所述的編碼3α- 羥基類固醇脫氫酶的核苷酸序列。

6.根據權利要求5所述的重組載體，其特征在于，所述空載體為 pET28b(+)。

7.一種重組宿主細胞，其特征在于，所述重組宿主細胞含有權利要求5 或6所述的重組載體。

8.根據權利要求7所述的重組宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為 大腸桿菌BL21(DE3)、大腸桿菌Rosetta(DE3)或大腸桿菌DH5α。

9.一種檢測膽汁酸濃度的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括以下(a) -(d)中的至少一種：

(a)權利要求1所述的3α-羥基類固醇脫氫酶；

(b)權利要求2-4中任意一項所述的編碼3α-羥基類固醇脫氫酶的核苷 酸序列；

(c)權利要求5或6所述的重組載體；

(d)權利要求7或8所述的重組宿主細胞。

10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：溶 于pH?3.5-4.5的50-200mmol/L?2-(N-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中的0.2-5g/L氧 化型β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸；以及溶于pH?9.0-11.0的50-200mmol/L 3-(環己胺)-2-羥基-1-丙磺酸緩沖液中的2-10g/L的還原型β-硫代煙酰胺腺嘌 呤二核苷酸、0.1-10mmol/L的NaN₃和2-20KU/L的3α-羥基類固醇脫氫酶。