[發明專利]定量檢測金黃色葡萄球菌腸毒素B的膠體金免疫層析方法以及膠體金免疫檢測試紙條

無效

• 申請號: 200910090041.3
• 申請日: 2009-07-29
• 公開（公告）號: CN101666802A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發明（設計）人: 王靜;姜永強;張曉龍;楊宇;孫肖紅;胡孔新;姚李四
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/552;G01N33/532
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 尹振啟

1.一種檢測金葡菌腸毒素B型的方法，其中包括將待測標本與樣品稀釋液混勻，再將樣品混合液加入檢測試紙樣品孔處，樣品中的液體依靠虹吸作用上行，10-15分鐘判讀結果；所述檢測試紙包括：

(1)反應支持物；

(2)吸水墊；

(3)硝酸纖維膜，該膜包被有金葡菌腸毒素B型抗體和質控抗體的檢測條帶和質控條帶；

(4)金標抗體墊，其中含有膠體金標記的金葡菌腸毒素B型抗體；

(5)樣品墊；

其中所述抗SEB的抗體可以是多克隆抗體，也可是單克隆抗體；多抗可選自兔抗SEB、鼠抗SEB；質控抗體可選自羊抗兔、鼠抗兔、人抗兔、兔抗羊、鼠抗羊、人抗羊、羊抗鼠、人抗鼠、兔抗鼠的IgG。

2.根據權利要求1或2所述的方法，其中，吸水墊選用濾紙，反應支持物選用PVC板，金標抗體墊的材料選自聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維，樣品墊的材料選自聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。

3、根據權利要求3所述的方法，其中，所述試紙中的反應支持物(5)位于底層，硝酸纖維膜(2)位于反應支持物(5)上的中部，該膜的T處是兔抗SEB多克隆抗體包被的檢測條帶，并且C處是羊抗兔IgG包被的質控條帶；金標抗體墊(3)位于硝酸纖維膜上部的一側并與之部分重疊，該墊含有膠體金標記的兔抗SEB多克隆抗體；吸水墊(1)位于硝酸纖維膜(2)上部的相對于金標抗體墊(3)而言的另一側并與硝酸纖維膜(2)部分重疊，樣品墊(4)位于硝酸纖維膜(2)上與吸水墊(1)相反的一側并與金標抗體墊(3)部分重疊。

4、根據權利要求3所述的方法，其中，吸水墊一側為起始端，樣品墊一側為末端，檢測抗體的條帶位于接近末端，質控條帶接近于起始端。

5、根據權利要求3所述的方法，其中，SEB重組抗原，兔多抗。

6、根據權利要求5所述的方法，其中，所述兔抗SEB多克隆抗體的濃度為3-8mg/ml。

7、根據權利要求1-6任一項所述的方法，其中，質控抗體濃度為0.1-5mg/ml。

8、根據權利要求1-7任一項的方法，其中，所述抗SEB抗體標記1ml膠體金的量為5-20ug。

9、一種權利要求1-8任一項所述方法中的所述金葡菌腸毒素B型的檢測試紙的制備方法，該方法包括：

(1)用隔流噴金劃線機以一定噴膜速度噴涂抗SEB抗體和質控抗體兩個條帶的硝酸纖維膜；

(2)制備一種含有膠體金標記的抗SEB抗體的玻璃纖維膜，將膠體金標記的抗SEB抗體均勻涂布在玻璃纖維膜上，并烘干或冷凍干燥。

10、由權利要求9所述的方法制備的檢測金葡菌腸毒素B型的試紙。