[發明專利]合浦珠母貝外套膜外上皮細胞的分離方法

無效

• 申請號: 200910087696.5
• 申請日: 2009-07-03
• 公開（公告）號: CN101608173A
• 公開（公告）日: 2009-12-23
• 發明（設計）人: 張榮慶;謝莉萍;上官俊龍;李琪;劉曉軍;周玉娟
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、合浦珠母貝外套膜外上皮細胞的分離方法，其特征在于，所述方法含有以下步驟：

(1)配制細胞分離液梯度溶液：在離心管中，將9份細胞分離液原液與1份無鈣鎂離子的組織清洗液混合，得到100％細胞分離液溶液；將100％細胞分離液溶液與無鈣鎂離子的組織清洗液溶液以不同比例混合，制備所需的不同濃度和不同體積的細胞分離液梯度液；

(2)制備梯度層：取離心管，預先用牛血清白蛋白溶液浸泡管壁，傾去牛血清白蛋白溶液，加入上述細胞分離液梯度液制備梯度管；將濃度漸減的細胞分離液梯度液從離心管底部輕輕地逐層鋪；

(3)加入細胞懸液：用毛細管將待分離細胞懸液鋪至梯度管中最輕地細胞分離液溶液之上；

(4)細胞分離：離心后取出離心管，將各梯度層之間界面上的細胞分部收集于離心管中，加入無鈣鎂離子的組織清洗液溶液，離心，棄上清，加入無鈣鎂離子的組織清洗液溶液洗滌，重新懸浮后計數細胞。

2、按照權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(1)和(4)所述無鈣鎂離子的組織清洗液溶液，其配方是：NaCl?26.22g/L，KCl?1.08g/L，，NaHCO₃0.35g/L，Na₂HPO₄0.09g/L，KH₂PO₄0.06g/L，MilliQ水，調整pH為7.2-7.4，無菌過濾后使用。

3、按照權利要求1所述分離方法，其特征在于：步驟(2)所述牛血清白蛋白溶液，其配方是：將牛血清白蛋白加入到100毫升磷酸鹽緩沖(PBS)溶液中，待充分溶解后使用。