[發(fā)明專(zhuān)利]一種定量檢測(cè)血液中PSA和fPSA的磁性免疫層析試紙條及制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910087647.1
• 申請(qǐng)日: 2009-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101762691A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚洪濤;應(yīng)希堂;李強(qiáng);胡國(guó)茂;鄭金來(lái);于尚永
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京科美東雅生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/543;G01N33/577;G01N33/531;G01N33/532
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種定量檢測(cè)血液中PSA和fPSA的磁性免疫層析試紙條，其特征在于：該試紙條是在底板上依次相互交錯(cuò)2mm地粘貼包被膜、結(jié)合了總PSA抗體的磁顆粒墊、樣品墊、吸水墊、然后在上層覆蓋透明塑料密封膜而組裝成的試紙條，包被膜上預(yù)包被有總PSA+fPSA抗體的檢測(cè)線T1、T2和質(zhì)控線C。

2.磁性免疫層析法定量檢測(cè)血液中PSA和fPSA的磁性免疫層析試紙條制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、包被膜的制備：選用單克隆抗體技術(shù)制備的高效價(jià)總PSA+fPSA配對(duì)抗體，使用親和層析技術(shù)純化；使用0.02mM?PBS，pH7.2分別將抗總PSA+fPSA包被抗體以及羊抗兔IgG稀釋到0.5-2mg/ml濃度，使用定量噴液裝置分別將三者以0.5-0.8cm的間隔噴印于硝酸纖維素膜上，晾干后于封閉液中浸泡10分鐘后于25-35℃烘干8小時(shí)，加入干燥劑封存?zhèn)溆茫?/p>

B、磁顆粒墊的制備：選用直徑為100-300nm的超順磁顆粒，使用含有0.1％Tween-20的50mmol醋酸鈉緩沖液洗滌磁顆粒，加入EDC使終濃度為20mmol，室溫反應(yīng)1小時(shí)，充分洗滌磁顆粒后加入總PSA抗體與磁顆粒的分子比為5∶1，室溫反應(yīng)3小時(shí)，加入含有0.5％BSA的0.02MPBS，pH7.2室溫封閉30分鐘，洗滌磁顆粒，使用含有1％PVP，0.5％Tween-20，5％蔗糖的50mmol硼酸pH8.5的保存緩沖液，復(fù)溶磁顆粒，4℃保存?zhèn)溆茫皇褂猛瑯拥姆椒▽⑼肐gG標(biāo)記到磁顆粒上；將二者按照2∶1的比例充分混勻后使用保存緩沖液以1∶10-1∶15的比例將混合物稀釋。將稀釋好的磁顆粒使用定量噴液裝置以5μl/cm-25μl/cm的量噴涂于磁顆粒墊上；

C、樣品墊的處理：將樣品墊放入樣品墊處理溶液中浸泡處理1小時(shí)后取出25-35℃烘干8小時(shí)；所述的樣品墊處理液是含有1％-5％酪蛋白和0.1％-1％的聚乙烯醇以及0.01-0.2％吐溫-20的0.02M磷酸鹽緩沖液；

D、試紙條的組裝：在透明塑料底板上依次相互交錯(cuò)2mm貼上，包被膜，磁顆粒墊，樣品墊，吸水墊，上層透明塑料密封膜得到試紙板，根據(jù)要求寬度切割即得到試紙條。