[發明專利]一種檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒及專用引物和靶序列

有效

• 申請號: 200910087632.5
• 申請日: 2009-07-01
• 公開（公告）號: CN101591715A
• 公開（公告）日: 2009-12-02
• 發明（設計）人: 徐東剛;李伍舉;蔡欣;付文亮;曹源;鄒民吉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司
• 代理人: 史雙元

1.一種檢測甲型H1N1流感病毒的專用引物，由4條特異性引物組成，其特征在于，所述4條特異性引物的序列分別為：引物F1核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.2所示，引物B1核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.3所示，引物F2核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.4所示，引物B2核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.5所示。

2.一種檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒，其特征在于，包括含有權利要求1所述專用引物的反應預混液。

3.根據權利要求2所述的檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒，其特征在于，所述反應預混液為下述成分的混合液且各成分的終濃度為：引物F1?1.76μM；引物B?1?1.76μM；引物F2?0.29μM；引物B2?0.29μM；dNTP?2.05mM；1.47×Bst?DNA聚合酶緩沖液；MgSO₄11.76mM；甜菜堿1.47M。

4.根據權利要求3所述的檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括Bst?DNA聚合酶、RNA酶抑制劑、AMV反轉錄酶和無RNA酶的ddH₂O。

5.根據權利要求4所述的檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括SYBR?Green?I。

6.根據權利要求5所述的檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性模板和陰性模板。

7.一種非診斷目的的檢測甲型H1N1流感病毒的方法，其特征在于，以被檢測樣品的總RNA為模板，利用權利要求2-6任一項所述的檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒進行環介導反轉錄等溫擴增反應，然后鑒定被檢測樣品是否為甲型H1N1流感病毒陽性。?

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述環介導反轉錄等溫擴增反應的程序為62℃反應60min；然后80℃加熱2min終止反應。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述鑒定被檢測樣品是否為甲型H1N1流感病毒陽性的方法為下述方法中的一種或多種：

(1)利用反應沉淀濁度來判定，見白色沉淀為陽性；

(2)反應產物中加入熒光染料SYBR?Green?I來判定，呈綠色為陽性；

(3)通過電泳分析判定，見梯狀條帶為陽性。?