[發(fā)明專利]一種脂肪酶鍵合固定相及其制備方法和用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910086839.0
• 申請日: 2009-06-08
• 公開（公告）號: CN101574646A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周志強(qiáng);呂春光;賀澤英;范鑫鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: B01J20/286
• 分類號: B01J20/286;B01J20/29;B01J20/30
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 朱 琨

1.一種脂肪酶鍵合固定相的制備方法，其特征在于，所述脂肪酶鍵合固定相由表面帶有醛基的球形硅膠填料與脂肪酶的氨基以亞胺鍵直接鍵合，而后把亞胺還原為氨基制得，其具體制備步驟為：

1)環(huán)氧基硅膠的制備：在100mL三口瓶中加入3.0g球形硅膠和50mL?10％的鹽酸溶液，加熱回流12～14h后，停止加熱，抽濾，用蒸餾水洗滌至中性，60℃真空干燥12h，將干燥好的硅膠置于100mL三口瓶中，然后加入5～8mL?3-縮水甘油丙氧基三甲氧基硅烷和50mL無水甲苯，氮氣保護(hù)下于110℃回流攪拌反應(yīng)12～14h，然后停止加熱，抽濾，依次用甲苯，甲醇，丙酮和正己烷洗凈，60℃真空干燥12h；

2)二醇基硅膠的制備：將上述步驟1)中制備的環(huán)氧基硅膠置于500mL三口瓶中，然后加入300mL、pH＝3～4的硫酸溶液回流攪拌反應(yīng)1.5h，然后停止加熱，抽濾，用蒸餾水洗滌至中性，室溫下真空干燥12h；

3)醛基硅膠的制備：將上述步驟2)中制備的二醇基硅膠置于100mL三口瓶中，然后加入60mL?90％的醋酸水溶液和2～3g高碘酸鈉攪拌反應(yīng)2h，抽濾，用蒸餾水洗凈；

4)脂肪酶鍵合固定相的制備：稱取南極假絲酵母脂肪酶B?150～600mg，置于250mL三口瓶中，加入100mL、pH＝5～6的0.1mol/L醋酸鹽緩沖液，攪拌溶解，加入上述步驟3)中制備的醛基硅膠3g和75mg氰基硼氫化鈉，于0～4℃攪拌反應(yīng)3～5天，抽濾，用pH＝8的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液洗凈；所得固定相在100mL?pH＝8的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液中，在2～3h內(nèi)分3次共加入硼氫化鈉75mg，每次25mg，以還原硅膠表面剩余的醛基，抽濾，用pH＝8的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液洗凈，得到所需脂肪酶鍵合固定相。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酶鍵合固定相的制備方法，其特征在于，所述球形硅膠的粒徑為5～30微米，孔徑為200～4000埃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酶鍵合固定相的制備方法，其特征在于，所述球形硅膠由日本富士公司購得；所述南極假絲酵母脂肪酶B由荷蘭Chiralvision公司購得。

4.權(quán)利要求1所述方法制備的脂肪酶鍵合固定相的用途，其特征在于，用作手性色譜柱及在線液相色譜反應(yīng)器填料。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述手性色譜柱填料用作分離手性化合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述手性色譜柱填料用作分離1-萘乙醇、2-萘乙醇、1-萘丙醇、2-萘丙醇或烯唑醇。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述在線液相色譜反應(yīng)器填料用作催化手性仲醇酯和3-氯-1-(2-噻吩)丙醇丁酸酯的不對稱水解。