[發(fā)明專利]檢測(cè)頭孢類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910085945.7
• 申請(qǐng)日: 2009-06-01
• 公開（公告）號(hào): CN101571539A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何方洋;張建軍;馮才偉;萬宇平;馮靜;馮才茂;崔海峰;徐念琴;趙正苗;李勇;劉福林;劉平;朱亮亮;陳煒琳;羅貴昆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京望爾康泰生物技術(shù)有限公司;北京望爾生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/566;G01N33/531;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)，具體涉及一種用于檢測(cè)頭孢類藥物的酶聯(lián) 免疫試劑盒，其特別適于雞肉、豬肉、魚、蝦組織和牛奶樣本中頭孢類藥物殘 留的檢測(cè)。

技術(shù)背景

頭孢類藥物是一種廣譜的抗生素，具有優(yōu)良的抗菌活性和藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)，對(duì)許 多革蘭氏陽性和革蘭氏陰性及產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的細(xì)菌有效。頭孢類藥物是采用破 壞細(xì)菌細(xì)胞壁的方式殺死細(xì)菌。由于目前使用的檢測(cè)分析法樣本前處理及測(cè)定 操作繁瑣且費(fèi)用較高，使推廣應(yīng)用受到限制。

頭孢類藥物殘留量的常規(guī)檢測(cè)方法主要有高效液相色譜(HPLC)、液相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)、紙色譜等，由于復(fù)雜的儀器設(shè)備和繁瑣的過程以 及對(duì)檢驗(yàn)人員的高技能要求，不適合現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣本的篩查。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述不足提供一種用于頭孢類藥物檢測(cè)的酶聯(lián)免疫 試劑盒，其操作簡(jiǎn)單，適合現(xiàn)場(chǎng)大批量樣品的篩選。

本發(fā)明試劑盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶標(biāo)板(包被原為抗原、抗體或抗抗體)；

(2)酶標(biāo)記物(為酶標(biāo)記半抗原、酶標(biāo)記抗體或酶標(biāo)記抗抗體)；

(3)頭孢類藥物特異性抗體工作液(當(dāng)酶標(biāo)板上包被抗原且酶標(biāo)記物為酶標(biāo) 記抗抗體或酶標(biāo)板上包被抗抗體且酶標(biāo)記物為酶標(biāo)記半抗原時(shí)含有)；

(4)頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

(5)底物顯色液；

(6)終止液；

(7)濃縮洗滌液；

(8)濃縮復(fù)溶液。

本發(fā)明所述頭孢類藥物包括頭孢噻呋、頭孢曲松、頭孢噻肟等具有共 同分子骨架藥理活性的藥物。

本發(fā)明所提供的檢測(cè)頭孢類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括頭孢類藥物特異性 抗體工作液及預(yù)包被包被原的酶標(biāo)板和酶標(biāo)記物工作液；所述酶標(biāo)記物為酶標(biāo) 記的抗抗體，酶標(biāo)記頭孢類藥物半抗原或酶標(biāo)記頭孢類藥物特異性抗體；所述 抗抗體為羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體。

所述頭孢類藥物半抗原是通過頭孢噻呋和6-氨基正己酸反應(yīng)得到的頭孢 噻呋正己酸酯半抗原。

所述酶標(biāo)記物的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酯酶，其中優(yōu)選辣根 過氧化物酶；酶標(biāo)記的羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體是采用戊二醛法或過碘酸 鈉法將標(biāo)記酶與抗抗體進(jìn)行偶聯(lián)得到的；酶標(biāo)記頭孢類藥物半抗原是采用混合 酸酐或碳化二亞胺法將標(biāo)記酶與頭孢類藥物半抗原偶聯(lián)得到的；酶標(biāo)記特異性 抗體是采用戊二醛法或過碘酸鈉法將標(biāo)記酶與特異性抗體偶聯(lián)得到的，辣根過 氧化物酶可采用現(xiàn)有技術(shù)中的多種方法將其與抗抗體進(jìn)行偶聯(lián)，如戊二醛法， 過碘酸鈉法等，本發(fā)明經(jīng)過長(zhǎng)期的勞動(dòng)創(chuàng)造將過碘酸鈉法進(jìn)行了改良，使其省 時(shí)、降低辣根過氧化物酶(HRP)與抗抗體的濃度比率，節(jié)省了原材料。

所述頭孢類藥物特異性抗體可為頭孢類藥物單克隆抗體或頭孢類藥物多克 隆抗體；它們均是用頭孢類藥物半抗原與載體蛋白采用混合酸酐法或碳化二亞 胺法得到的偶聯(lián)物作為免疫原得到的；所述頭孢類藥物多克隆抗體可為鼠源、 馬源、羊源、兔源或豚鼠源抗體，所述頭孢類藥物單克隆抗體優(yōu)選為頭孢類藥 物鼠單克隆抗體，所述頭孢類藥物多克隆抗體優(yōu)選為頭孢類藥物兔多克隆抗體。

所述頭孢類藥物單克隆抗體優(yōu)選為頭孢類藥物的單克隆雜交瘤細(xì)胞株 C-4-3CGMCC?No.3111分泌的單克隆抗體。

所述頭孢類藥物單克隆雜交瘤細(xì)胞株C-4-3CGMCC?No.3111(分類命名：頭 孢類藥物的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株)已于2009年05月26日保藏于中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)大 屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)。

以上抗體均可以用頭孢類藥物半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物作為免疫原制 備。所述載體蛋白可為鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白(BCG)、牛血清蛋白、兔血清 蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白和纖維蛋白原等常用載體蛋白；所述 頭孢類藥物半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物可通過將頭孢類藥物半抗原和載體蛋白 用混合酸酐法或碳化二亞胺法進(jìn)行偶聯(lián)得到。

為了更方便現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣本篩查，所述試劑盒還包括頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)品 溶液、顯色劑、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。