[發明專利]一種硝基呋喃化合物及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 200910085647.8
• 申請日: 2009-05-27
• 公開（公告）號: CN101643505A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發明（設計）人: 吳小平;王戰輝;江海洋;張靜;阮永磊;王進;王亞輝
• 申請（專利權）人: 北京維德維康生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種硝基呋喃化合物及其制備方法與應用。

背景技術

硝基呋喃類物質(Nitrofurans)是一類人工合成的具有5-硝基呋喃環基本結構的 廣譜抗菌藥物，主要包括呋喃西林(Nitrofurazone)、呋喃妥因(Nitrofurantion)、呋喃 唑酮(Furazolidone)和呋喃它酮(Furaltadone)。硝基呋喃類物質對大多數革蘭氏陽性 菌、革蘭氏陰性菌、真菌和原蟲等病原體均有殺滅作用，在畜禽養殖、水產養殖上 應用非常廣泛。但硝基呋喃類物質對畜禽有一定的毒性，動物大劑量或長期連續服 用硝基呋喃類物質易引起中毒性反應，表現為厭食、腹瀉、胃腸出血、周圍神經炎、 興奮、驚厥或癱瘓等，中毒嚴重時甚至可以引起動物死亡。同時硝基呋喃類物質也 是一類具有潛在致癌性和誘導有機體產生突變的物質。1990年7月歐盟頒布 2377/90/EEC條例，將硝基呋喃類物質及其代謝產物列為A類禁用藥物，規定其在動 物源性食品中的殘留檢測限為1.0μg/kg。由于對呋喃唑酮蛋白結合態殘留物的安全 性產生懷疑，自1995年起，歐盟全面規定禁止使用呋喃類抗菌物質，在動物源性食 品中呋喃類殘留物的檢出限為不得檢出。歐盟從1997年開始將所有的硝基呋喃類抗 生素全部列為違禁藥物。2004年美國FDA公布了禁止在進口動物源性食品中使用的 11種藥物名單，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。我國農業部文件農牧發[2002]1號 也規定動物源性食品中呋喃唑酮的檢出限為不得檢出。目前，國內外都對呋喃類物 質的控制相當嚴格，各國對于呋喃類物質測定的標準都有明確的規定。

國內外已發表的有關硝基呋喃類抗生素殘留檢測方法的文獻中，早期的文獻報 道多數是檢測原藥化合物。但研究表明，硝基呋喃類物質原藥的半衰期通常只有幾 小時，而其代謝產物則可以長達數周仍能在動物組織中殘留。目前，國內外報道多 見于檢測硝基呋喃類物質的代謝物，儀器檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、 液相色譜-質譜法(LC-MS)、液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)。其中，LC-UV、 LC-MS及LC-MS/MS是目前用來檢測硝基呋喃類物質代謝物最常用的方法，但在實 際操作中需要有LC-UV、LC-MS及LC-MS/MS等高檔儀器，且前處理復雜、繁瑣、 操作時間長、操作技術要求高。而免疫分析方法采用針對硝基呋喃類物質代謝物的 特異性抗體，可以有很高的精確度、靈敏性和特異性，且對技術要求不高，具有檢 測時間短，適用于大批量測定等優點。免疫分析檢測技術是近年來在環境、食品安 全監測領域逐漸廣泛應用的一種快速、高通量、低成本的檢測技術，已逐漸成為世 界各國對有毒有害殘留物快速篩選監測的主要方法之一，這為硝基呋喃類物質代謝 物的檢測提供了一種新的途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種硝基呋喃化合物及其制備方法與應用。

本發明所提供的硝基呋喃化合物，是將5-硝基呋喃-2-丙烯酸與載體蛋白偶聯得 到的偶聯物。

上述硝基呋喃化合物中，所述載體蛋白為牛血清白蛋白。

上述硝基呋喃化合物的制備方法包括以下步驟：

1)將5-硝基呋喃-2-丙烯酸、N，N’-二環己基碳化二亞胺(DCC)和N-羥基琥 珀酰亞胺(NHS)混合，將混合物溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，得到溶 液A；

將載體蛋白溶解于磷酸鹽緩沖液中，得到溶液B；

2)將溶液B滴加到溶液A中，得到硝基呋喃化合物。

上述方法中，所述步驟1)中，所述5-硝基呋喃-2-丙烯酸、所述N，N’-二環己 基碳化二亞胺和所述N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1∶(3-5)∶(2-3)，具體可 為1∶4∶3；

所述載體蛋白具體可為牛血清白蛋白(BSA)；

所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4，摩爾濃度為0.01M；

所述5-硝基呋喃-2-丙烯酸與載體蛋白的摩爾比為(8-10)∶1，具體可為8∶1。

上述方法還包括將所述硝基呋喃化合物進行透析的步驟，所述透析的條件為： 4-20℃用PBS透析72-96小時，具體可為4℃用PBS溶液透析72小時；

前三次，每隔4小時更換一次透析液，從第四次開始，每10-12小時更換一次 透析液；