[發明專利]表達非淀粉多糖復合酶的重組巴氏畢赤酵母菌及其應用

有效

• 申請號: 200910083481.6
• 申請日: 2009-05-06
• 公開（公告）號: CN101544954A
• 公開（公告）日: 2009-09-30
• 發明（設計）人: 吳培均;李卓夫;李富偉;段文娟
• 申請（專利權）人: 北京挑戰生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N9/42;A23K1/165;C12R1/84
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢

1.重組菌，是含有木聚糖酶基因、纖維素酶基因和β-甘露聚糖酶基因的重組巴氏畢赤酵母菌；

所述木聚糖酶基因的編碼序列是Genbank號為AJ292317的5′端第1-576位的核苷酸序列；所述纖維素酶基因的核苷酸序列是Genbank號為EU022559的5′端第88-1500位的核苷酸序列；所述β-甘露聚糖酶基因的核苷酸序列是Genbank號為AY623903的5′端第122-1051位的核苷酸序列；

所述巴氏畢赤酵母菌為巴氏畢赤酵母菌GS115。

2.如權利要求1所述的重組巴氏畢赤酵母菌，其特征在于：所述木聚糖酶基因通過重組表達載體a導入巴氏畢赤酵母菌中，構成重組巴氏畢赤酵母菌A；所述重組表達載體a是將所述木聚糖酶基因插入到表達載體pPIC9上得到的表達木聚糖酶的重組表達載體。

3.如權利要求2所述的重組巴氏畢赤酵母菌，其特征在于：所述纖維素酶基因通過重組表達載體b導入重組巴氏畢赤酵母菌A中，構成重組巴氏畢赤酵母菌B；所述重組表達載體b是將所述纖維素酶基因插入到表達載體pPIC9K上得到的表達纖維素酶的重組表達載體。

4.如權利要求3所述的重組巴氏畢赤酵母菌，其特征在于：所述β-甘露聚糖酶基因通過重組表達載體c導入所述重組巴氏畢赤酵母菌B中得到權利要求1所述的重組菌；所述重組表達載體c是將所述β-甘露聚糖酶基因連接到表達載體pPICZαA上得到的表達β-甘露聚糖酶的重組表達載體。

5.如權利要求1-4中任意一項所述的重組巴氏畢赤酵母菌，其特征在于：所述重組菌為巴氏畢赤酵母(Pichia?pastoris)CGMCC№.3025。

6.權利要求1-5中任意一項所述的重組巴氏畢赤酵母菌在生產非淀粉多糖復合酶中的應用。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于：所述應用是將權利要求1-5中任意一項所述的重組巴氏畢赤酵母菌，在溫度28-30℃，pH5.0-6.0，溶氧為30％-60％，進行誘導發酵，表達出非淀粉多糖復合酶；所述培養用培養基為YPD培養基或BMGY培養基；所述BMGY培養基含有如下終濃度的物質：質量百分濃度為1％的酵母提取物，質量百分濃度為2％的蛋白胨，100mmol/L?pH6.0磷酸緩沖液，質量百分濃度為1.34％的YNB，質量百分濃度為0.00004％生物素，和體積百分比1％的甘油的培養基；所述YPD培養基含有如下終濃度的物質：質量百分濃度為1％酵母提取物，質量百分濃度為2%的蛋白胨，質量百分濃度為2%的葡萄糖的培養基；所述重組菌在YPD培養基中培養30-60小時。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述重組菌在YPD培養基中培養48小時。

9.權利要求1-5中任意一項所述的重組巴氏畢赤酵母菌在生產飼料中的應用。