[發明專利]經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞，其制法、應用、試劑盒及包括其的疫苗

無效

• 申請號: 200910083085.3
• 申請日: 2009-04-30
• 公開（公告）號: CN101560496A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發明（設計）人: 沈麗;郝麗敏;王亞軍;馬艷玲;黃啟明
• 申請（專利權）人: 北京弘潤天源生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;C12N13/00;C12Q1/02;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司
• 代理人: 鐘 晶

技術領域

本發明涉及樹突狀細胞及其制備方法、該樹突狀細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用、制備該樹突狀細胞的試劑盒，以及包括該樹突狀細胞的疫苗。特別地，本發明涉及經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞及其制備方法、該經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用、制備該經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞的試劑盒，以及包括該經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞的疫苗。

背景技術

目前腫瘤的治療方法包括手術治療、放射治療和化療。但現有的腫瘤治療方法不能根治腫瘤。主要原因是構成腫瘤的細胞中含腫瘤干細胞，其具有干細胞的生物學特性，即自我更新、多潛能分化、高耐受性(例如對化療藥物的高耐藥性及對放射治療的高耐輻射性)及極少數的腫瘤干細胞還驅動腫瘤的形成。因此腫瘤干細胞是腫瘤發生和發展(腫瘤的生長、腫瘤產生耐受性、腫瘤復發和腫瘤轉移等)的真正元兇。

現有技術已嘗試使用樹突狀細胞免疫治療方法來治療癌癥，即從患者腫瘤中將腫瘤干細胞分離出來，通過裂解該腫瘤干細胞得到抗原，并將該抗原負載到患者的樹突狀細胞上。如此得到的靶向腫瘤干細胞的樹突狀細胞，可以用于治療癌癥。例如：WO?2008/039874中公開了從腦腫瘤中分離出干細胞樣腫瘤細胞(stem-like?cell)，然后將由其制備得到的抗原負載到樹突狀細胞上，并用所得樹突狀細胞治療癌癥的方法。

現有技術僅公開了如何得到相關腫瘤干細胞，但并未教導對獲取的腫瘤干細胞進行處理。并且，現有技術的上述方法雖然以腫瘤干細胞為靶標，但是該方法仍然存在腫瘤在放療和化療后耐藥性、復發率和轉移率高的問題

發明內容

為了克服現有以普通腫瘤干細胞為靶標的癌癥免疫治療方法仍然存在腫瘤在放療和化療后耐藥、復發和轉移的問題，本發明的目的是提供一種經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞及其制備方法、該經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用、制備該經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞的試劑盒，以及包括該經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞的疫苗。

現有技術認為經射線照射和/或與大劑量化療藥物接觸后，腫瘤干細胞會被全部殺死，但是本發明的發明人意外地發現，在一定范圍內經射線照射和/或與大劑量化療藥物接觸后，腫瘤干細胞不但不會被完全殺死，而且還會產生具有很強耐受性的腫瘤干細胞。一般劑量的射線照射和/或化療藥物很難殺滅所述經耐受性篩選的腫瘤干細胞。

本發明提供了一種經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞的制備方法，該方法包括：通過裂解經耐受性篩選的腫瘤干細胞得到腫瘤干細胞抗原組合物，將樹突狀細胞與經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原組合物接觸得到負載腫瘤抗原的抗癌樹突狀細胞，其中，所述經耐受性篩選的腫瘤干細胞通過以下方法制備，該方法包括：

對腫瘤干細胞進行射線照射和/或化療藥物篩選的步驟，

所述射線照射篩選通過將腫瘤干細胞暴露于射線的照射源下完成，所述射線選自由X射線、β射線、α射線和γ射線所組成的組中，

所述化療藥物篩選通過使腫瘤干細胞與化療藥物接觸完成，所述化療藥物選自由烷化劑化療藥物、亞硝脲化療藥物、抗代謝化療藥物、抗生素化療藥物、植物化療藥物、激素及內分泌藥物化療藥物、抗體阻斷劑化療藥物、植物化療藥物、抗體阻斷劑化療藥物、門冬酰胺酶、甲基芐肼、氮烯咪胺、順鉑、卡鉑、草酸鉑、丙亞胺和羥基脲所組成的組中。

本發明還提供了由上述的方法得到的經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞。

本發明還提供了一種經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞疫苗，所述樹突狀細胞疫苗包括樹突狀細胞，其特征在于，所述樹突狀細胞為本發明所述的經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞。

本發明還提供了本發明的經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞疫苗在制備抗腫瘤藥物中的應用。

本發明還提供了一種制備本發明的經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞的試劑盒，其中，所述試劑盒包括：

1)腫瘤干細胞基礎培養基；

2)放射治療同位素源和/或化療藥物；

3)消化細胞的酶；

4)B27、N2、表皮細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子和胰島素的至少一種；

5)樹突狀細胞基礎培養基；

6)巨粒細胞-噬細胞集落刺激因子；

7)白介素-4、干擾素α和腫瘤壞死因子α的至少一種；以及

6)使用說明書；