[發明專利]經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞，其制法、應用、試劑盒及包括其的疫苗

無效

• 申請號: 200910083085.3
• 申請日: 2009-04-30
• 公開（公告）號: CN101560496A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發明（設計）人: 沈麗;郝麗敏;王亞軍;馬艷玲;黃啟明
• 申請（專利權）人: 北京弘潤天源生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;C12N13/00;C12Q1/02;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司
• 代理人: 鐘 晶

1.一種經耐受性篩選的腫瘤干細胞抗原負載的樹突狀細胞的制備方法，該方法包括：通過裂解腫瘤干細胞得到腫瘤干細胞抗原組合物，將正常樹突狀細胞與腫瘤干細胞抗原組合物接觸得到負載腫瘤抗原的抗癌樹突狀細胞，其特征在于，所述腫瘤干細胞通過以下方法制備，該方法包括：

對腫瘤干細胞進行射線照射和/或化療藥物篩選的步驟，

所述射線照射篩選通過將腫瘤干細胞暴露于射線的照射源下完成，所述射線選自由X射線、β射線、α射線和γ射線所組成的組中，

所述化療藥物篩選通過使腫瘤干細胞與化療藥物接觸完成，所述化療藥物選自由烷化劑化療藥物、亞硝脲化療藥物、抗代謝化療藥物、抗生素化療藥物、植物化療藥物、激素及內分泌藥物化療藥物、抗體阻斷劑化療藥物、植物化療藥物、抗體阻斷劑化療藥物、門冬酰胺酶、甲基芐肼、氮烯咪胺、順鉑、卡鉑、草酸鉑、丙亞胺和羥基脲所組成的組中。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述射線照射的照射源與腫瘤干細胞的直線距離為10cm-5m，所述射線照射的總劑量為2Gy-10Gy，所述射線照射的劑量率為0.4-1200cGy/min。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述射線照射的照射源與腫瘤干細胞的直線距離為20cm-2m，所述射線照射的總劑量為3Gy-9Gy，所述射線照射的劑量率為2-600cGy/min。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述射線為X射線和/或γ射線。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述化療藥物在腫瘤干細胞培養基中的終濃度范圍為0.1-100mg/mL，所述化療藥物與腫瘤干細胞接觸的時間為1h-72h。

6.據權利要求5所述的方法，其中，所述化療藥物在腫瘤干細胞培養基中的終濃度范圍為0.5-50mg/mL，所述化療藥物與腫瘤干細胞接觸的時間為12h-36h。

7.根據權利要求1所述的方法，其中，所述烷化劑化療藥物選自由氮芥、環磷酰胺、異環磷酰胺、氮甲、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥和噻替派所組成的組中；所述亞硝脲類化療藥物選自由卡氮芥、環己亞硝脲、甲環亞硝脲、嘧啶亞硝脲、白消安和雌二醇氮芥所組成的組中；所述抗代謝藥化療藥物選自由甲氨喋呤、氟尿嘧啶、喃氟啶、優福啶、卡莫氟、脫氧氟尿苷、氟尿脫氧核苷、環胞苷、阿糖胞苷和雙氟胞苷所組成的組中；所述抗生素化療藥物選自由放線菌素D、絲裂霉素、博來霉素、平陽霉素、阿霉素、吡喃阿霉素、表-阿毒素、去甲氧柔紅霉素和米托蒽醌所組成的組中；所述植物化療藥物選自由長春新堿、長春花堿、長春地辛、長春瑞賓、鬼臼乙叉甙、鬼臼噻吩甙、羥基喜樹堿、伊立替康、托泊替康、紫杉醇、泰素帝、三尖杉酯堿和羥基紫杉醇所組成的組中；所述激素及內分泌藥物化療藥物選自由潑尼松、地塞米松、丙酸睪丸素、乙烯雌酚、氟硝丁酰胺、孕酮、甲地孕酮、他莫昔芬、雌激素受體拮抗劑、托瑞米芬、氨魯米特、福美司坦、來曲唑和促性腺激素釋放激素拮抗劑所組成的組中；所述抗體阻斷劑化療藥物選自由表皮生長因子抑制劑吉非替尼、厄洛替尼、西妥昔單抗和尼妥珠單抗所組成的組中。

8.根據權利要求1所述的方法，其中，所述化療藥物選自由4-羥-環磷酰胺、吉非替尼、厄洛替尼、五氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇和順鉑所組成的組中。

9.根據權利要求1所述的方法，其中，該方法包括：

對腫瘤干細胞進行射線照射篩選的步驟，

所述射線照射的照射源與腫瘤干細胞的直線距離為20cm-2m，所述射線照射的總劑量為3Gy-9Gy，所述射線照射的劑量率為2-600cGy/min。

10.根據權利要求1所述的方法，其中，該方法包括：

對腫瘤干細胞進行化療藥物篩選的步驟，

所述化療藥物在腫瘤干細胞培養基中的終濃度范圍為0.5-50mg/mL，所述化療藥物與腫瘤干細胞接觸的時間為12-36h。