[發(fā)明專利]一種篩選疾病標(biāo)志物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910083074.5
• 申請日: 2009-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN101538614A
• 公開（公告）日: 2009-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚蔚泓;上官棣華;方曉紅;王柯敏;楊朝勇
• 申請（專利權(quán)）人: 譚蔚泓
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/10;C40B30/04;C12P19/34;C12Q1/48
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān) 暢

1、一種篩選疾病標(biāo)志物的方法，包括如下步驟：

(a)用離體的靶疾病細(xì)胞對核酸文庫進(jìn)行篩選，得到與靶疾病相關(guān)的核酸適體；所述核酸文庫為單鏈的隨機(jī)核苷酸序列的文庫；

(b)將所述與靶疾病相關(guān)的核酸適體與所述離體的靶疾病細(xì)胞上的靶分子結(jié)合，得到所述核酸適體和所述靶分子的復(fù)合物，再分離所述復(fù)合物，得到所述靶疾病細(xì)胞上的靶分子，即為靶疾病標(biāo)志物。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：在所述步驟(a)后、步驟(b)前，包括將所述核酸適體標(biāo)記的步驟。

3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟(a)中篩選的方法包括如下步驟：

(1)以所述核酸文庫為起始核酸文庫；

(2)將所述起始核酸文庫的溶液與所述離體的靶疾病細(xì)胞孵育，得到所述靶疾病細(xì)胞與起始核酸文庫中部分核酸分子的復(fù)合體，分離復(fù)合體，得到與所述離體的靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸文庫；

(3)將所述與所述離體的靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸文庫的溶液與離體的非靶疾病細(xì)胞孵育，分離去除與所述離體的非靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸分子，剩余沒有與所述非靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸分子；

(4)得到與靶疾病相關(guān)的核酸適體。

4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，在所述得到與所述離體的靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸文庫后，包括如下步驟：PCR擴(kuò)增所述與離體的靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸文庫，并制備成單鏈。

5、根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，在所述剩余沒有與所述非靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸分子后，包括如下步驟：PCR擴(kuò)增所述沒有與所述非靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸分子，并制備成單鏈。

6、根據(jù)權(quán)利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(a)中篩選的方法中，在所述步驟(3)之后、步驟(4)之前，包括至少1次以下操作：以所述沒有與所述非靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸分子為起始核酸文庫，重復(fù)步驟(2)和(3)，每次操作均以前一次操作中得到的沒有與所述非靶疾病細(xì)胞結(jié)合的核酸分子為起始核酸文庫。

7、根據(jù)權(quán)利要求3-6中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(a)中，在所述得到與靶疾病相關(guān)的核酸適體后、所述將所述核酸適體標(biāo)記前，包括對所述核酸適體進(jìn)行修飾的步驟；所述修飾的方法為對所述核酸適體進(jìn)行剪切、對所述核酸適體中的核苷酸單元進(jìn)行替換、對所述核酸適體中的堿基、核糖或磷酸骨架進(jìn)行修飾。

8、根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(b)中，將所述與靶疾病相關(guān)的核酸適體與所述離體的靶疾病細(xì)胞上的靶分子結(jié)合的方法為將所述與靶疾病相關(guān)的核酸適體與所述靶疾病細(xì)胞的裂解液共同孵育。

9、根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：所述疾病為白血病。

10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：所述疾病標(biāo)志物為蛋白酪氨酸激酶7。