[發明專利]一種新的檢測血清樣本中禽流感抗體的方法和產品

無效

• 申請號: 200910083003.5
• 申請日: 2009-04-28
• 公開（公告）號: CN101533023A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 王靜;楊永莉;楊宇;孫肖紅;胡孔新
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/546;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 尹振啟

技術領域

本發明涉及一種新的檢測血清樣本中禽流感抗體的定量檢測方法和產品及其制備方法。

背景技術

禽流感病毒屬甲型流感病毒，甲型流感病毒多發于禽類，一般來說，禽流感病毒與人流感病毒存在受體特異性差異，禽流感病毒是不容易感染給人的。個別造成人感染發病的禽流感病毒可能是發生了變異的病毒，但1997年香港禽流感病毒首次突破種間障礙直接感染人共有18位香港居民感染了H5N1亞型流感病毒，其中6人死亡事件的發生，打破了人們對禽流感病毒的傳統認識模式，研究表明，感染人的禽流感病毒亞型主要為H5N1、H9N2、H7N7，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。

免疫學方法酶聯免疫實驗(ELISA)中利用抗原與抗體特異性反應來檢測抗原或抗體主要有由雙抗原夾心測抗體、雙抗體夾心測抗原、競爭法、間接法等。間接法測抗體的原理是特異性抗原結合到固相載體上，然后和待檢血清中的相應抗體結合形成免疫復合物，洗滌后再加酶標記抗體與免疫復合物中的抗體結合形成酶標記抗體-抗體-固相抗原復合物，加底物顯色，判斷抗體含量。

懸浮芯片(suspension?array)也稱液相芯片，是20世紀70年代美國Luminex公司研制出的新一代生物芯片技術，利用帶編碼的微球體作為載體，流式細胞儀作為檢測平臺，對核酸、蛋白質等生物分子進行大規模測定。目前，該技術已廣泛應用于免疫分析、核酸研究、酶學分析、抗體篩選及受體與配體的識別分析等領域。

目前發展的懸浮芯片主要是針對細胞因子的檢測。懸浮芯片是否能夠檢測人血清中的禽流感抗體，其定量檢測能力如何，尚缺乏模型和評價。

發明內容

本發明涉及一種新的檢測血清中禽流感菌抗體的蛋白懸浮芯片，該芯片包括：編碼微球，作為包被微球抗原是禽流感H5蛋白抗原，生物素標記的羊抗兔IgG和羊抗人IgG作為檢測抗體，鏈親和素-藻紅蛋白和適宜的緩沖溶液，所述編碼微球可選擇任意編號的編碼微球。

本發明提供上述檢測禽流感抗體的蛋白懸浮芯片的制備方法，其特征在于，在相關緩沖溶液中，編碼微球用禽流感H5蛋白抗原包被、用生物素標記的檢測抗體為羊抗兔IgG和羊抗人IgG、用鏈親和素-藻紅蛋白作為信號檢測物。

本發明提供一種禽流感抗體的蛋白懸浮芯片定量檢測方法，該方法采用間接法檢測抗體的免疫學檢測原理，其特征在于，在檢測過程中所有反應可在96孔濾板上或在微量離心管中進行，其中包括下列步驟：(1)每孔或管中加入含有已包被捕獲抗原，即禽流感H5蛋白抗原的編碼微球的工作溶液，用清洗液清洗；(2)加入待測血清樣品，孵育后清洗；(3)加入用生物素化的檢測抗體，孵育后清洗；(4)加入鏈親和素-藻紅蛋白(SA-PE)，孵育后清洗，(5)加入檢測緩沖液后混勻，(6)用懸浮芯片系統讀取MFI數值(即平均熒光強度)并分析數據判定檢測結果陰性或陽性。

本發明還提供一種檢測血清樣品中禽流感抗體的蛋白懸浮芯片定量檢測方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：(1)加入的陽性檢測樣品或標準品經4倍梯度倍比系列稀釋，(2)制作樣品濃度對應MFI值的劑量-反應標準曲線，(3)用分析軟件擬合劑量-反應曲線和方程，(4)可根據劑量-反應曲線判定方法動態檢測范圍，未知濃度樣品可根據劑量-反應方程計算出檢測樣品的濃度。