[發(fā)明專利]一種新的檢測(cè)血清樣本中禽流感抗體的方法和產(chǎn)品

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910083003.5
• 申請(qǐng)日: 2009-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN101533023A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王靜;楊永莉;楊宇;孫肖紅;胡孔新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/543;G01N33/546;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 尹振啟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新的檢測(cè)血清樣本中禽流感抗體的定量檢測(cè)方法和產(chǎn)品及其制備方法。

背景技術(shù)

禽流感病毒屬甲型流感病毒，甲型流感病毒多發(fā)于禽類，一般來說，禽流感病毒與人流感病毒存在受體特異性差異，禽流感病毒是不容易感染給人的。個(gè)別造成人感染發(fā)病的禽流感病毒可能是發(fā)生了變異的病毒，但1997年香港禽流感病毒首次突破種間障礙直接感染人共有18位香港居民感染了H5N1亞型流感病毒，其中6人死亡事件的發(fā)生，打破了人們對(duì)禽流感病毒的傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)模式，研究表明，感染人的禽流感病毒亞型主要為H5N1、H9N2、H7N7，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。

免疫學(xué)方法酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)中利用抗原與抗體特異性反應(yīng)來檢測(cè)抗原或抗體主要有由雙抗原夾心測(cè)抗體、雙抗體夾心測(cè)抗原、競(jìng)爭(zhēng)法、間接法等。間接法測(cè)抗體的原理是特異性抗原結(jié)合到固相載體上，然后和待檢血清中的相應(yīng)抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后再加酶標(biāo)記抗體與免疫復(fù)合物中的抗體結(jié)合形成酶標(biāo)記抗體-抗體-固相抗原復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗體含量。

懸浮芯片(suspension?array)也稱液相芯片，是20世紀(jì)70年代美國(guó)Luminex公司研制出的新一代生物芯片技術(shù)，利用帶編碼的微球體作為載體，流式細(xì)胞儀作為檢測(cè)平臺(tái)，對(duì)核酸、蛋白質(zhì)等生物分子進(jìn)行大規(guī)模測(cè)定。目前，該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于免疫分析、核酸研究、酶學(xué)分析、抗體篩選及受體與配體的識(shí)別分析等領(lǐng)域。

目前發(fā)展的懸浮芯片主要是針對(duì)細(xì)胞因子的檢測(cè)。懸浮芯片是否能夠檢測(cè)人血清中的禽流感抗體，其定量檢測(cè)能力如何，尚缺乏模型和評(píng)價(jià)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種新的檢測(cè)血清中禽流感菌抗體的蛋白懸浮芯片，該芯片包括：編碼微球，作為包被微球抗原是禽流感H5蛋白抗原，生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG和羊抗人IgG作為檢測(cè)抗體，鏈親和素-藻紅蛋白和適宜的緩沖溶液，所述編碼微球可選擇任意編號(hào)的編碼微球。

本發(fā)明提供上述檢測(cè)禽流感抗體的蛋白懸浮芯片的制備方法，其特征在于，在相關(guān)緩沖溶液中，編碼微球用禽流感H5蛋白抗原包被、用生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體為羊抗兔IgG和羊抗人IgG、用鏈親和素-藻紅蛋白作為信號(hào)檢測(cè)物。

本發(fā)明提供一種禽流感抗體的蛋白懸浮芯片定量檢測(cè)方法，該方法采用間接法檢測(cè)抗體的免疫學(xué)檢測(cè)原理，其特征在于，在檢測(cè)過程中所有反應(yīng)可在96孔濾板上或在微量離心管中進(jìn)行，其中包括下列步驟：(1)每孔或管中加入含有已包被捕獲抗原，即禽流感H5蛋白抗原的編碼微球的工作溶液，用清洗液清洗；(2)加入待測(cè)血清樣品，孵育后清洗；(3)加入用生物素化的檢測(cè)抗體，孵育后清洗；(4)加入鏈親和素-藻紅蛋白(SA-PE)，孵育后清洗，(5)加入檢測(cè)緩沖液后混勻，(6)用懸浮芯片系統(tǒng)讀取MFI數(shù)值(即平均熒光強(qiáng)度)并分析數(shù)據(jù)判定檢測(cè)結(jié)果陰性或陽性。

本發(fā)明還提供一種檢測(cè)血清樣品中禽流感抗體的蛋白懸浮芯片定量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：(1)加入的陽性檢測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)4倍梯度倍比系列稀釋，(2)制作樣品濃度對(duì)應(yīng)MFI值的劑量-反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，(3)用分析軟件擬合劑量-反應(yīng)曲線和方程，(4)可根據(jù)劑量-反應(yīng)曲線判定方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍，未知濃度樣品可根據(jù)劑量-反應(yīng)方程計(jì)算出檢測(cè)樣品的濃度。