[發(fā)明專利]一種炭疽芽孢桿菌芽孢的蛋白質(zhì)懸浮芯片制備及定量檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910080259.0
• 申請日: 2009-03-17
• 公開（公告）號: CN101504415A
• 公開（公告）日: 2009-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王靜;周蕾;孫肖紅;楊宇;胡孔新;楊瑞馥
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/546
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 尹振啟

1、一種利用蛋白質(zhì)懸浮芯片檢測炭疽芽孢桿菌芽孢的方法，其特征在于，檢測過程中全部反應(yīng)可在96孔濾板或者微量離心管中進(jìn)行，該方法包括下列步驟：

(1)向孔加入含已包被捕獲抗體編碼微球的工作溶液，用清洗液清洗；

(2)加入待測樣品，孵育后清洗；

(3)加入用生物素化的檢測抗體，孵育后清洗；

(4)加入SA-PE，孵育后清洗；

(5)加入檢測緩沖液后混勻；

(6)用懸浮芯片系統(tǒng)讀取平均熒光強(qiáng)度(FMI)數(shù)值并分析數(shù)據(jù)判定檢測結(jié)果。

2、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，用于包被微球的捕獲抗體為抗炭疽芽孢抗體，采用生物素標(biāo)記的抗炭疽芽孢抗體作為檢測抗體，并且其組合組成檢測體系。

3、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的包被微球的捕獲抗體羊抗Sterne抗體用量為10μg/1.25×10⁶個編碼微球或20-40ng/2500-5000個微球/測試。

4、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中的標(biāo)記檢測抗體兔抗Sterne抗體的生物素為羧基活性的生物素。

5、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，2mg/mL生物素化的檢測抗體Bio-兔抗Sterne抗體以1:50-1:5000稀釋作為檢測抗體進(jìn)行檢測。

6、一種定量檢測炭疽芽孢桿菌芽孢的蛋白質(zhì)懸浮芯片方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：

(1)加入的陽性檢測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)梯度倍比稀釋，所述梯度倍比稀釋為10倍；

(2)將系列稀釋樣品在懸浮芯片系統(tǒng)中檢測讀取對應(yīng)熒光值(MFI)；

(3)制作樣品濃度對應(yīng)MFI值的劑量-反應(yīng)曲線；

(4)用分析軟件擬合劑量-反應(yīng)曲線和方程；

(5)未知濃度樣品可根據(jù)劑量-反應(yīng)曲線和方程判斷未知樣本中炭疽芽孢濃度。

7、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，用于包被微球的捕獲抗體為羊抗Sterne抗體，采用生物素標(biāo)記的兔抗Sterne抗體作為檢測抗體，并且其組合組成檢測體系。

8、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的包被微球的捕獲抗體羊抗Sterne抗體用量為10μg/1.25×10⁶個編碼微球或20-40ng/2500-5000個微球/測試。

9、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法中的標(biāo)記檢測抗體兔抗Sterne抗體的生物素為羧基活性的生物素。

10、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，2mg/mL生物素化的檢測抗體Bio-兔抗Sterne抗體以1:50-1:5000稀釋作為檢測抗體進(jìn)行檢測。

11、一種檢測炭疽芽孢桿菌芽孢的蛋白質(zhì)懸浮芯片，其特征在于：包括：編碼微球，包被微球的所述炭疽芽孢的捕獲抗體、生物素標(biāo)記的炭疽芽孢檢測抗體、鏈親和素-藻紅蛋白及所述的緩沖溶液。

12、權(quán)利要求11所述的蛋白質(zhì)懸浮芯片，其特征在于：用于包被微球的捕獲抗體為羊抗Sterne抗體，采用生物素標(biāo)記的兔抗Sterne抗體作為檢測抗體，并且其組合組成檢測體系。