[發明專利]一種蓖麻毒素的蛋白質懸浮芯片制備及定量檢測方法

無效

• 申請號: 200910080254.8
• 申請日: 2009-03-17
• 公開（公告）號: CN101545905A
• 公開（公告）日: 2009-09-30
• 發明（設計）人: 王靜;王景林;楊宇;孫肖紅;胡孔新
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/546;G01N21/76
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 尹振啟

1、一種采用蛋白質懸浮芯片檢測蓖麻毒素的方法，其特征在于，檢測過程中全部反應可在96孔濾板或者微量離心管中進行，該方法包括下列步驟：

(1)向孔加入含已包被捕獲抗體編碼微球的工作溶液，用清洗液清洗；

(2)加入待測樣品，孵育后清洗；

(3)加入用生物素化的檢測抗體，孵育后清洗；

(4)加入SA-PE，孵育后清洗；

(5)加入檢測緩沖液后混勻；

(6)用懸浮芯片系統讀取平均熒光強度(FMI)數值并分析數據判定檢測結果。

2、如權利要求1所述的方法，其特征在于，用于包被微球的捕獲抗體為抗蓖麻毒素A抗體，采用生物素標記的抗蓖麻毒素A抗體作為檢測抗體，并且其組合組成檢測體系。

3、如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的包被微球的捕獲抗體兔抗蓖麻毒素A抗體用量為10μg/1.25×10⁶個編碼微球或20-40ng/2500-5000個微球/測試。

4、如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中的標記檢測抗體蓖麻毒素單抗RCA的生物素為羧基活性的生物素。

5、如權利要求1所述的方法，其特征在于，2mg/mL生物素化的檢測抗體Bio-RCA以1:50—1:1000稀釋作為檢測抗體進行檢測。

6、一種定量檢測蓖麻毒素的蛋白質懸浮芯片方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：

(1)加入的陽性檢測樣品或標準品經梯度倍比稀釋，所述梯度倍比稀釋為4倍；

(2)將系列稀釋樣品在懸浮芯片系統中檢測讀取對應熒光值(MFI)；

(3)制作樣品濃度對應MFI值的劑量-反應曲線；

(4)用分析軟件擬合劑量-反應曲線和方程；

(5)未知濃度樣品可根據劑量-反應曲線和方程判斷未知樣本中蓖麻毒素濃度。

7、如權利要求6所述的方法，其特征在于，用于包被微球的捕獲抗體為兔抗蓖麻毒素A抗體，采用生物素標記的蓖麻毒素單抗RCA作為檢測抗體，并且其組合組成檢測體系。

8、如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的包被微球的捕獲抗體兔抗蓖麻毒素A抗體用量為10μg/1.25×10⁶個編碼微球或20-40ng/2500-5000個微球/測試。

9、如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法中的標記檢測抗體蓖麻毒素單抗RCA的生物素為羧基活性的生物素。

10、如權利要求6所述的方法，其特征在于，2mg/mL生物素化的檢測抗體Bio-RCA以1:50—1:1000稀釋作為檢測抗體進行檢測。

11、一種檢測蓖麻毒素的蛋白質懸浮芯片，其特征在于：包括：編碼微球，包被微球的蓖麻毒素的捕獲抗體、生物素標記的蓖麻毒素檢測抗體、鏈親和素-藻紅蛋白及所述的緩沖溶液。

12、權利要求11所述的蛋白質懸浮芯片，其特征在于：用于包被微球的捕獲抗體為抗蓖麻毒素A抗體，采用生物素標記的抗蓖麻毒素抗體作為檢測抗體，并且其組合組成檢測體系。