[發明專利]制備抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗體的方法

有效

• 申請號: 200910079258.4
• 申請日: 2009-03-05
• 公開（公告）號: CN101497909A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 孫志偉;余云舟;俞煒源;杜韞;林建波
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K16/12;C12R1/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

1.一種制備A型肉毒毒素免疫原的方法，包括如下步驟：

1)將序列表中序列1所示基因轉入宿主菌中，得到含有所述基因的重組菌；

2)發酵步驟1)得到的重組菌，得到含有A型肉毒毒素免疫原的產物；

3)將步驟2)得到的產物進行陽離子交換層析，得到一次純化產物；所述陽離 子交換層析使用SP陽離子交換柱，所用的洗脫緩沖液為含300mM?NaCl、pH值為 7.4的20mM磷酸鈉溶液；

4)將步驟3)得到的一次純化產物進行陰離子交換層析，得到二次純化產物； 所述陰離子交換層析中使用Q陰離子交換層析柱；

5)將步驟4)得到的二次純化產物進行疏水層析，得到A型肉毒毒素免疫原； 所述疏水層析使用辛基HIC疏水層析柱，所用的洗脫緩沖液為含50mM?NaCl的20mM 磷酸鈉溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因是通過重組表達載體 pTIG-Trx-AHc轉入所述宿主菌中的；

所述重組表達載體pTIG-Trx-AHc是通過將序列表中序列1所示基因插入原核 表達載體pTIG-Trx的多克隆位點得到的；

所述原核表達載體pTIG-Trx是通過將序列表中序列2所示的硫氧還蛋白基因 插入載體pET-22b(+)的多克隆位點得到的。

3.一種制備抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗體的方法，包括如下步驟：用權利 要求1或2所述方法制備A型肉毒毒素免疫原，得到A型肉毒毒素免疫原；將所述 A型肉毒毒素免疫原免疫動物，制備得到抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗體；所述動 物為馬。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述方法還包括如下步驟：在 所述免疫后，取動物免疫血清，用胃蛋白酶消化，得到切除副作用片段的抗A型肉 毒毒素免疫球蛋白抗體。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述取動物免 疫血清后，所述用胃蛋白酶消化前，還包括滅活所述血清的步驟。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述用胃蛋白 酶消化后，還包括用硫酸銨沉淀所述切除副作用片段的抗A型肉毒毒素免疫球蛋白 抗體的步驟。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述硫酸銨沉 淀后，包括用DEAE陰離子交換劑進行純化的步驟。