[發(fā)明專利]一種可定量檢測(cè)鼠疫耶爾森菌的蛋白質(zhì)懸浮芯片方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910078819.9
• 申請(qǐng)日: 2009-03-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101493468A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王靜;孫肖紅;楊宇;張曉龍;胡孔新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/546
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽(yáng)光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 尹振啟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種可定量檢測(cè)細(xì)菌的方法，尤其是適合定量檢測(cè)和分析鼠疫耶爾森菌(Yersinia?pestis)的蛋白質(zhì)懸浮芯片檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

耶爾森菌屬(Yersinia)腸桿菌科，現(xiàn)有11個(gè)種，其中3種使人致病，它們分別為鼠疫耶爾森菌(Y.pestis)、假結(jié)核耶爾森菌(Y.pseudotuberculosis)和小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)，以下分別簡(jiǎn)稱為鼠疫菌、假結(jié)核菌和小腸結(jié)腸炎菌。

在鼠疫菌、假結(jié)核菌和小腸結(jié)腸炎菌這三種致病耶爾森菌中，鼠疫菌為耶爾森菌屬的模式菌種，為革蘭氏陰性球桿菌、不運(yùn)動(dòng)、不形成芽孢，吉母薩、瑞特氏或威森染色呈雙極濃染，能在4-40℃范圍內(nèi)生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為28-30℃，最適生長(zhǎng)pH值為7.2-7.6，pH的耐受上下極限分別為pH5.0和pH9.6。鼠疫菌主要宿主為嚙齒動(dòng)物，主要通過(guò)蚤的叮咬在動(dòng)物間傳播，也可傳播到人，引起病人發(fā)燒、寒顫、頭痛，有少數(shù)患者會(huì)由敗血型鼠疫發(fā)展為肺鼠疫。

鼠疫在歷史上曾經(jīng)引起三次世界范圍的大流行，使人類遭受了深重的災(zāi)難。2000年世界衛(wèi)生組織(WHO)將鼠疫列為重新抬頭的傳染病。同時(shí)，鼠疫菌傳染性強(qiáng)、發(fā)病迅速，是生物戰(zhàn)劑和生物恐怖的重要病原之一。

出于公共衛(wèi)生和國(guó)家安全的目的，研究和開(kāi)發(fā)快速、定性、定量檢測(cè)傳染病病原體是所屬技術(shù)領(lǐng)域中長(zhǎng)期致力追求的目標(biāo)。尤其對(duì)于鼠疫菌來(lái)說(shuō)，作為一種烈性傳染病的病原體，能否實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)至關(guān)重要。目前用于鼠疫菌的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)方法有細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法、血清學(xué)檢測(cè)方法及檢測(cè)核酸的分子生物學(xué)方法(Perry，R.D.&Fetherston，J.D.Yersinia?pestis--etiologic?agent?of?plague.Clin?Microbiol??Rev1997，10(1)，35-66.)。但是，細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法、血清學(xué)檢測(cè)方法(例如間接血凝方法)及核酸檢測(cè)法等現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)存在許多缺陷。對(duì)于細(xì)菌學(xué)檢測(cè)法，細(xì)菌培養(yǎng)耗時(shí)較長(zhǎng)，不適合對(duì)鼠疫菌的快速檢測(cè)。莢膜抗原(F1抗原)是目前公認(rèn)的鼠疫菌種特異性抗原之一，檢測(cè)鼠疫菌F1抗原及其抗體是鼠疫診斷的重要依據(jù)(Drobkov?VI，Abdullin?JG，DarmovIV.Use?of?the?enzyme?immunoassay?in?the?laboratory?diagnosis?ofplague[J].Zhurnal?Mikrobiol.Epidemiol.Immunobiol.1992，16(10)：40-42.；Williams?JE，Arntzen?L，Tyndal?GL，Isaacson?M.Applicationof?enzyme?immunoassay?for?the?confirmation?of?clinically?suspectplague?in?Namibia，1982.Bull.W.H.O.1986，62：745-752.)。檢測(cè)鼠疫菌特異性抗體(F1抗體)的間接血凝方法(I?HA)，靈敏度低，特異性差(Williams，J.E.，Arntzen，L.，Robinson，D.M.&et?al.Comparison?of?passive?haemagglutination?and?enzyme-linkedimmunosorbent?assay?for?serodiagnosis?of?plague.Bull?WHO?1982，60，777-781.)。對(duì)于核酸檢測(cè)法，盡管采用了PCR技術(shù)對(duì)鼠疫菌進(jìn)行檢測(cè)和分析(Hinnebusch，J.&Schwan，T.G.New?method?for?plaguesurveillance?using?polymerase?chain?reaction?to?detect?Yersiniapestis?infleas.J?Clin?Microbiol?1993，31(6)，1511-1514.；Higgins，J.A.，Ezzell，J.，Hinnebusch，B.J.，Shipley，M.，Henchal，E.A.&Ibrahim，M.S.5′nuclease?PCR?assay?to?detect?Yersinia?pestis.JClin?Microbiol?1998，36(8)，2284-2288.；Neubauer，H.，Meyer，H.，Prior，J.，Aleksic，S.，Hensel，A.&Splettstos?ser，W.Acombination?of?different?polymerase?chain?reaction(PCR)as?saysfor?the?presumptive?identification?of?Yersinia?pestis.J?Vet?MedB?Infect?Dis?Vet?Public?Health?2000，47(8)，573-580.)，尤其是實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Herbert，T.，Emil，C.R.，Sascha，A.D.&etal.Rapid?detection?of?Yersinia?pestis?with?multiplex?real-timePCR?assays?using?fluorescent?hybridisation?probes.FEMS?ImmunolMed?Microbiol?2003，38，117-126)，特異性高，不容易被污染，但是現(xiàn)有PCR技術(shù)的方法繁瑣，特別是此類方法包括DNA/RNA的提取和復(fù)雜的操作步驟，而且不能用于非核酸物質(zhì)如蛋白質(zhì)的檢測(cè)，因此核酸檢測(cè)法具有局限性且不方便。