[發明專利]以卵裂后的發育胚胎替代卵母細胞的治療性克隆新方法

有效

• 申請號: 200910077408.8
• 申請日: 2009-02-09
• 公開（公告）號: CN101798569A
• 公開（公告）日: 2010-08-11
• 發明（設計）人: 周琪;阿姆賈德·里亞茲;趙小陽;李偉;于洋;王柳
• 申請（專利權）人: 北京華盛興邦生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/06
• 分類號: C12N15/06;C12N5/16;C12N15/00;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 李丙林;張英

1.一種獲得小鼠核移植受體的方法，其特征在于，所述核移植受 體為卵裂后的發育胚胎，所述方法包括以下步驟：

將所述卵裂后的發育胚胎的卵裂球融合成單細胞的胚 胎，以及使所述單細胞的胚胎同步到有絲分裂中期。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在注射人絨毛膜促 性腺激素之后38-40小時，將所述卵裂球進行所述融合。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，使所述單細胞 的胚胎同步到有絲分裂中期是通過用0.05μg/ml?democolcine 處理融合后的所述單細胞胚胎7小時，之后用2.5-3μM? MG-132處理30-40分鐘來實現的。

4.一種利用小鼠核移植受體獲得小鼠胚胎干細胞的方法，所述核 移植受體根據權利要求1至3中任一項所述的方法獲得，所述 方法包括：

去除所述核移植受體的染色體，進行核移植操作，獲得 重構胚胎；以及在所述重構胚胎發育到囊胚階段時，分離核移 植胚胎干細胞。

5.根據權利要求4所述的獲得小鼠胚胎干細胞的方法，其中所述 核移植操作使用的供體選自小鼠的胎兒體細胞、成體體細胞、 胚胎干細胞或者卵裂球。

6.一種利用小鼠核移植受體獲得克隆小鼠的方法，所述核移植受 體根據權利要求1至3中任一項所述的方法獲得，其中所述方 法包括：

去除所述核移植受體的染色體，進行核移植操作，獲得 重構胚胎；以及在所述重構胚胎發育到囊胚階段時，將其移植 到代孕動物的子宮中，獲得所述克隆小鼠。

7.根據權利要求1至3中任一項所述的方法獲得的小鼠核移植受 體在獲得小鼠核移植胚胎干細胞或克隆小鼠中的應用。