[發明專利]木耳菌種的組織分離方法

無效

• 申請號: 200910077053.2
• 申請日: 2009-01-19
• 公開（公告）號: CN101473758A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 崔寶凱;杜萍;戴玉成
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04;C12N1/14
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所
• 代理人: 葉 凡;王志剛

技術領域

本發明涉及一種食用菌的菌種分離方法，尤其涉及一種利用組織分離方法分離和純化木耳菌種的方法，屬于食用菌的菌種分離、純化領域。

背景技術

我國幅員遼闊，包含熱帶、亞熱帶、溫帶等氣候地帶。各種各樣的地形，溫和、潮濕的優越條件可適合生長多種木耳，東北地區，中部地區和南方是我國木耳的主要生長區域，黑木耳[Auricularia?auricula(L.)Underw.]和毛木耳[A.polytricha(Mont.)Sacc.]是分布最廣泛，產量最高的種類。

黑木耳是我國人民喜愛的傳統食品，是烹調高級萊肴不可缺少的佐料。黑木耳肉質細膩，營養豐富，含有人體必需的多種氨基酸，肝糖、維生素和礦質元素等。藥用子實體具有降血脂、抗血栓、降血糖(范亞明，1991，1993)、清肺益氣，補血活血，鎮靜止痛等功效，是一種天然的食藥兼用菌，也是世界公認的保健品。毛木耳具有與黑木耳類似的營養和藥用價值，近年來由于其產品質量和產量均得以提高，加之在醫療保健方面的作用，深受廣大蕈菌工作者的關注和消費者的喜愛。

黑木耳在我國已有1400多年的栽培歷史，目前其栽培遍布20多個省(市、區)，產量占世界首位，在國際市場上享有較高的聲譽，是國內外市場供不應求的緊缺商品。近年來，隨著山區開礦和城鎮建設使木耳物種的數目日益減少甚至滅絕，對木耳種質資源的收集、保存及研究成為一項必不可少的基礎工作，在山區發展經濟和建設社會主義新農村方面具有重要的指導意義。

一株優良的木耳菌株經過多年的擴大生產使用，其優良特性會出現嚴重的退化現象，必須進行重新分離復壯，為了保證黑木耳產業的正常發展，不間斷地選育優良菌種勢在必行。

傳統的選育菌種大多是通過組織分離方法，多用鮮耳直接分離或將干耳用水泡濕后再分離。目前也有采用干耳進行分離的，但程序繁雜，所用藥品較多，條件差的地方難以做到。由于受多種藥物的作用，即使分離成功，菌絲萌發和生長也很緩慢。黑木耳的耳瓣薄，并富有膠質，所以在過去的分離法中很少采用耳片組織分離。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有的干耳菌種分離方法中所存在的操作復雜、成本高、菌絲分離成功率低、質量差等缺陷，提供一種操作簡單，用材少(包括藥品)，成本低，菌絲萌發快，長勢強，濃密，分離成功率高的干耳組織分離方法，以解決木耳的常規分離法所存在的一系列技術問題，為廣大制種工作者提供方便。

本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的：

一種木耳菌種的組織分離方法，包括：(1)將干木耳消毒并潤濕；(2)剪取耳片組織塊；(3)將耳片組織塊用酒精燈的火焰進行滅菌消毒；(4)將耳片組織塊插入到分離培養基中進行恒溫分離培養；(5)挑取新生長出的菌絲作為接種塊接種至純化培養基中進行純化培養，即得；其中，上述各步驟都是在無菌條件下進行的操作。

其中，所述的木耳可以是黑木耳[Auricularia?auricula(L.)Underw.]、毛木耳[A.polytricha(Mont.)Sacc.]或皺木耳(A.delicata(Fr.)Henn.)等膠質耳；為了達到最優的效果，最好挑選朵型大、肉質厚、無筋或少筋、顏色正、無霉、無蟲害等野生或栽培的當年頭茬干木耳作為分離原材料；

其中，步驟(1)中所述的干木耳的消毒和潤濕優選采用以下方式進行：用75％酒精棉球擦拭干木耳的表面2～3遍，并用酒精棉包住木耳耳片2～3min；將干木耳剪成耳片組織塊之前，需要將其消毒并進行潤濕；現有的木耳的組織分離方法中多是采用升汞進行消毒處理，升汞對周圍環境有害，對木耳也有一定的不利影響，用升汞消毒后需要用清水進行反復沖洗；但是干木耳如果潤濕過度，將其剪成耳片組織塊后，由于缺乏硬度和韌性無法將其插入到分離培養基中并將其保持豎立，這樣的結果是分離成功率非常低。本發明人通過一系列的實驗發現，如果采用75％酒精棉球擦拭干木耳的表面2～3遍，這在保證消毒的效果的同時又兼有潤濕的作用，再加上“用酒精棉包住木耳耳片2～3min”這一方式，可保證將木耳耳片的潤濕程度控制在較為理想的狀態(能將其插入到分離培養基中并保持豎立)，這為后續的成功分離奠定了良好的基礎。

步驟(2)中所述的耳片組織塊優選按照以下方法剪取得到：將耳片四周邊緣去掉，剪取遠離耳基沒有筋的平坦部位；因為發明人通過實驗發現，遠離耳基沒有筋的平坦部位的耳片，相對來說，一是雜菌污染少，容易徹底消毒，二是該部位的活力相對來說較強。