[發明專利]一種蛋白質復合物或復合體的三維凝膠電泳分離方法

無效

• 申請號: 200910076496.X
• 申請日: 2009-01-05
• 公開（公告）號: CN101768207A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發明（設計）人: 陳國強;李智立
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C07K1/26
• 分類號: C07K1/26
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種蛋白質復合物或復合體的三維凝膠電泳分離方法，包括下述步驟：

1)將蛋白質混合物進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法分離，然后將其染色；

2)切下步驟1)中得到的含目標蛋白質復合物或復合體的凝膠條帶，并將其脫色和脫水；

3)用蛋白質變性溶液浸泡步驟2)中處理過的凝膠條帶，將其碾碎后進行二維凝膠電泳方法分離。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中，所述脫色為用含25mM碳酸氫銨和50％(體積分數)乙腈的溶液浸泡沖洗所述含目標蛋白質復合物或復合體的凝膠條帶。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在所述步驟2)中，所述脫水為用脫水劑浸泡所述含目標蛋白質復合物或復合體的凝膠條帶，然后使脫水劑揮發；或者采用真空離心干燥的方法，將膠內水分完全揮發；所述脫水劑為甲醇、乙醇、丙酮或乙腈。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：；所述脫水劑為乙腈。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在所述步驟3)中，所述蛋白質變性溶液為含7M尿素、2M硫脲和0.02g/ml?3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸內鹽的溶液。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在所述步驟3)中，所述用于浸泡凝膠的蛋白質變性溶液的體積量不僅包括能使第一維等電聚焦電泳方法所用的固相pH梯度膠條充分水化的體積量，還包括被凝膠吸脹的體積量，被凝膠吸脹的體積量為每個凝膠條帶20μl。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的方法，其特征在于：丙烯酰胺單體和甲叉雙丙烯酰胺兩者總含量在所述非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法的分離膠中與所述二維凝膠電泳方法中的第一維等電聚焦電泳方法所用的固相pH梯度膠條中的差值在0.02g/ml以下。