[發(fā)明專利]耐酸性霉菌的培養(yǎng)分離方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910074352.0
• 申請日: 2009-05-12
• 公開（公告）號: CN101570733A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 成劍峰;何于飛;王勇亮;李恩偉;胡紅娟
• 申請（專利權(quán)）人: 山西省食品工業(yè)研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 山西太原科衛(wèi)專利事務(wù)所
• 代理人: 朱 源;鄭晉周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)分離技術(shù)，具體為一種耐酸性霉菌的培養(yǎng)分離方法。

背景技術(shù)

從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。在現(xiàn)行的教課書中，如《微生物學(xué)實驗》(高等教育出版社1980.11.42)中記載了微生物分離純化的原理和方法：采用平板分離法，，一般包括兩個方面：一是選擇適合于待分離微生物的生長條件等要求或者加入某種抑制劑造成只利于該特定微生物生長，而抑制其它微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。二是將混合的微生物稀釋后在固體培養(yǎng)基生長形成若干個單個菌落，每個菌落可以認(rèn)為是一個菌體細胞繁殖而成的集合體，因此可通過挑取單菌落再培養(yǎng)而達到分離純化的目的。該方法操作簡便，用于微生物的分離與純化。

中國科學(xué)院微生物研究所編寫的《常見與常用真菌》(科學(xué)出版社.1973.8.270)中記載的方法有劃線法和稀釋法，使用的平板均為瓊脂平板，其劃線法為：將固體培養(yǎng)基熔化，冷卻至45℃，注入無菌培養(yǎng)皿中，稍微搖轉(zhuǎn)，靜置，使成平板備用。取分離物少許，投入盛無菌水的試管內(nèi)，振搖，使微生物懸浮于水中。將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌并冷卻后，蘸一環(huán)上述懸浮液，在平板上劃線。劃線完畢，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時間，挑取單菌落。稀釋法操作過程為：取無菌水若干管，每管含有無菌水，用筆分別標(biāo)記順序號。然后取樣品，投入第1號管內(nèi)，振搖，使懸浮均勻。再從1號管中吸取定量懸浮液注入2號管，并將2號管搖動，使懸浮液均勻，根據(jù)需要稀釋的倍數(shù)同樣類推。然后將稀釋后的含菌液注入二個無菌培養(yǎng)皿中，再加入熔化后冷至45℃的培養(yǎng)基，在桌面上搖轉(zhuǎn)，靜置，使凝成平板，然后倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時間，挑取單菌落。

專利申請?zhí)枮?4103474.7公開了一種微生物分離培養(yǎng)方法，要點是將含目的微生物的自然物質(zhì)，置于適量容積的滅菌容器中，用無菌水或培養(yǎng)液浸提出適量含菌液，置于特定頻率特定電場強度的條件下培養(yǎng)分離，用不同的電場條件，即可得到相應(yīng)的目的微生物。本發(fā)明分離培養(yǎng)微生物迅速準(zhǔn)確，變異極小，保持了野生型的特性。專利申請?zhí)枮?00680008409.1公開了一種用于分離微生物的方法和裝置特點是在所述培養(yǎng)基的提取物中加入給定數(shù)量的磁性或可磁化粒子，孵育所述粒子和所述培養(yǎng)基一段足夠長時間以使所述微生物生長并附著到所述粒子的表面，從所述培養(yǎng)基中分離所述粒子，在與所述微生物生長相容的一種載體上鋪開所述粒子，在一種載體上孵育所述粒子一段足夠長時間是對應(yīng)于所分離的微生物的菌落生長。

以上所有的方法都離不開培養(yǎng)基，常規(guī)微生物固體分離培養(yǎng)基都選用瓊脂作為凝固劑。瓊脂具有很強的凝固性，且無臭、無味，吸水性和持水性高，具有特殊的凝固點和熔點，所含成分很難被微生物分解利用，不含抑制性成分，非常適合用于微生物培養(yǎng)基的制備。但溶液的PH值對其凝固性有影響。培養(yǎng)基處于酸性條件下時，滅菌溫度、滅菌時間與凝固性呈負(fù)相關(guān)，瓊脂量、PH值與凝固性呈正相關(guān)。所以常規(guī)分離培養(yǎng)基PH控制在3.5以上，而一些耐酸菌如紅曲霉生長最適PH為3-5，能耐PH2.5的酸性環(huán)境。在這樣的酸性條件下，瓊脂則不會凝固。例如賈秀玲在《山西食品工業(yè)》(1998(4)：10-11)發(fā)表的文章——PH值對瓊脂凝固性能的影響初探一文中，通過實驗論述了2％的瓊脂在不同PH值下滅菌后的凝固性，指出PH值低于4時，瓊脂失去凝固能力。所以在分離耐酸菌類過程中，只有得到有一定硬度的固體培養(yǎng)基，才有利于物質(zhì)的擴散和微生物對物質(zhì)的吸收，有利于劃線，涂布和影印等技術(shù)的操作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的微生物瓊脂培養(yǎng)基在低PH值下不易凝固、不易劃線、不易涂布而導(dǎo)致不利于嗜酸霉菌的單菌種的分離的問題提供了一種耐酸性霉菌的培養(yǎng)分離方法。

本發(fā)明是由以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，一種耐酸性霉菌的培養(yǎng)分離方法，包括以下步驟：

1、先將被分離物稀釋，

2、工具處理：將粉末活性炭過80目標(biāo)準(zhǔn)篩，然后鋪在濾紙上，再壓住活性炭往復(fù)涂擦，使活性炭顆粒滲透到濾紙纖維中，并使濾紙由白色變?yōu)榫鶆虻暮谏亢煤螅瑢V紙上多余的活性炭彈掉，并裁剪成符合培養(yǎng)皿規(guī)格的圓形，使其能放在培養(yǎng)皿中。濾紙可疊放多層，以利吸收更多液體培養(yǎng)基。將這種培養(yǎng)皿高溫殺菌，殺菌條件按常規(guī)方法。涂布用玻璃棒的處理方法：將涂布用玻棒與培養(yǎng)基接觸的一端用脫脂棉纏繞，并固定，常規(guī)方式滅菌。劃線用接種環(huán)的處理方法：將接種環(huán)一端用脫脂棉纏繞，常規(guī)方式滅菌。