[發(fā)明專利]一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910071751.1
• 申請日: 2009-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN101856015A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李春杰;許艷麗
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 劉同恩

1.一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法，其特征在于冷凍儲(chǔ)存方法按以下步驟操作：

步驟一、準(zhǔn)備儲(chǔ)存介質(zhì)和儲(chǔ)存袋：儲(chǔ)存介質(zhì)為蛭石，將蛭石過40-60目篩，去掉碎末，然后121℃濕熱滅菌25-30min，加水至蛭石含水量為45-60％；儲(chǔ)存袋為80-100目的尼龍網(wǎng)袋，將儲(chǔ)存介質(zhì)放入儲(chǔ)存袋中；

步驟二、接種：將10℃保存的新繁殖出來的昆蟲病原線蟲接種到儲(chǔ)存介質(zhì)蛭石中；按10^4-5IJs/g蛭石的劑量接種侵染期幼蟲；

步驟三、變溫冷凍儲(chǔ)存：接種后的蛭石放入冰箱，置于4-5℃環(huán)境中24h，之后以1℃/10min的速度降溫到-1℃，并在-1℃恒溫3h，然后再以1℃/10min的速度降溫到-4--5℃，并在-4--5℃保存；即完成昆蟲病原線蟲的冷凍儲(chǔ)存；

步驟四、解凍：以1℃/7min的速度升溫至4℃，4℃停留1h后，再置于室溫解凍24h；

步驟五、線蟲的分離：將裝有蛭石的尼龍網(wǎng)袋置于15-25℃水中浸泡，取出尼龍網(wǎng)袋后，浸泡液即為線蟲懸浮液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法，其特征在于步驟一中所述蛭石過50目篩。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法，其特征在于步驟一中所述尼龍網(wǎng)袋為80目。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法，其特征在于步驟三中蛭石含水量為50％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法，其特征在于步驟一中所述121℃濕熱滅菌30min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法，其特征在于步驟二中所述寒區(qū)異小桿屬按10⁴IJs/g蛭石的劑量接種侵染期幼蟲。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于寒區(qū)嗜菌異小桿昆蟲病原線蟲冷凍儲(chǔ)存方法，其特征在于步驟五中浸泡裝有蛭石的尼龍網(wǎng)袋的水溫為20℃。