[發(fā)明專利]大環(huán)內(nèi)酯類化合物及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910071629.4
• 申請日: 2009-03-25
• 公開（公告）號: CN101619067A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 向文勝;王明;王相晶;姜玲
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07D493/20
• 分類號: C07D493/20;C12P17/18;A61P33/00;A61P33/14;C12R1/465
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務(wù)所有限責(zé)任公司
• 代理人: 劉 婭

1.一種大環(huán)內(nèi)酯類化合物，其特征在于大環(huán)內(nèi)酯類化合物的結(jié)構(gòu)為：

X-Y...R為CH＝C...H；

化合物1

或X-Y...R為CH₂-CH...OH；

化合物2。

2.一種制備權(quán)利要求1所述的大環(huán)內(nèi)酯類化合物的制備方法，其特征是：制備化合物1和化合物2的方法為：將來源于產(chǎn)多拉菌素的細(xì)胞株，即由阿維鏈霉菌基因工程變異株(Streptomyces?avermitilis?strain?NEAU1069)，是于2009年03月11日保藏于“中國生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏登記號為：CGMCC?NO.2943，命名為NEAU?1069(Streptomyces?avermitilis)的菌株，經(jīng)斜面培養(yǎng)、種子培養(yǎng)、搖瓶發(fā)酵、分離純化而得；

其中，

所述的斜面培養(yǎng)為：培養(yǎng)基的組成包括可溶性淀粉20g、KNO₃?1g、K₂HPO₄?0.5g、MgSO₄·7H₂O?0.5g、FeSO₄·7H₂O?0.01g、瓊脂20g和蒸餾水1000ml，pH值7.2～7.4，于1×10⁵Pa下滅菌30min，接菌后在28～32℃下培養(yǎng)4d；

所述的種子培養(yǎng)為：培養(yǎng)基的組成包括葡萄糖5～10g、可溶性淀粉5～10g、牛肉膏5～10g、蛋白胨10～18g、氯化鈉5～8g和蒸餾水1000ml，pH值7.2，用250ml的三角瓶每瓶分裝100ml，然后用1ml無菌水將斜面的冰城鏈霉菌孢子洗下并制成孢子懸浮液，使其濃度為1×10⁶～1×10⁷個/ml，每瓶加1ml孢子懸浮液，置于搖床上28～32℃培養(yǎng)24～36h；

所述的搖瓶發(fā)酵為：采用液體搖瓶發(fā)酵，培養(yǎng)基組成為小米10～30g加蒸餾水1000ml煮沸15min后濾去米粒，加入葡萄糖15～30g、碳酸鈣2～15g、氯化鈉5～12g和蛋白胨5～15g，pH值7.2～7.4，于1×10⁵Pa下滅菌30min，分裝于250ml三角瓶，每瓶20～100ml，按體積比的接種量為10％，搖床轉(zhuǎn)速150～240r/min，28～32℃振蕩培養(yǎng)4～5d；

所述的分離和提純的方法為：發(fā)酵液經(jīng)100～200目篩網(wǎng)過濾后，濾渣用甲醇提取，提取液濃縮至一定體積后用EtOAc萃取，將萃取液濃縮后依次進行硅膠柱層析，RP-18柱層析所得到的化合物，得到兩種無色的粉末狀化合物1和化合物2。

3.根據(jù)權(quán)利要求書2所述的一種制備權(quán)利要求1所述的大環(huán)內(nèi)酯類化合物的制備方法，其特征是：所述的硅膠柱層析用到的填料是200-300目的硅膠，流動相為石油醚和乙酸乙酯按不同比例混合進行梯度洗脫。

4.根據(jù)權(quán)利要求書2所述的一種制備權(quán)利要求1所述的的大環(huán)內(nèi)酯類化合物的制備方法，其特征是：所述的RP-18是使用混合溶劑，即80∶20-95∶5和70∶30-90∶10的甲醇與水溶液進行梯度洗脫的。