[發(fā)明專利]一種用ACCα基因預(yù)示和鑒定雞腹脂量的分子標(biāo)記方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910071572.8
• 申請日: 2009-03-18
• 公開（公告）號: CN101603086A
• 公開（公告）日: 2009-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李輝;田建偉
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務(wù)所有限責(zé)任公司
• 代理人: 劉 婭

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種采用分子標(biāo)記檢測雞腹脂量的方法。

(二)背景技術(shù)

肉雞經(jīng)過各國育種者多年的選育，其生產(chǎn)性能有了顯著提高。在肉雞早期生長速度得 以明顯提高的同時，肉雞自身生理適應(yīng)能力等方面也出現(xiàn)了一系列亟待解決的問題。快大 型肉雞體脂(尤其是腹脂)蓄積過多已成為一個特別突出的問題。肉仔雞體內(nèi)沉積過多的 脂肪有諸多不利：(1)明顯降低飼料轉(zhuǎn)化效率，因為沉積單位重量的脂肪組織比沉積單位 重量的瘦肉多消耗三倍的能量；(2)降低了胴體瘦肉對脂肪組織的比例，因而降低了分割 肉產(chǎn)量；(3)加工者和消費者將肉仔雞體內(nèi)沉積的這些脂肪的很大一部分(腹脂墊、肌胃 周圍脂肪、嗉囔脂肪及腸系膜脂肪等)丟棄，這不僅增加了加工者和消費者的負(fù)擔(dān)，而且 增加了廢物及處理水中的脂肪含量，從而污染環(huán)境。由此看來，肉仔雞體內(nèi)沉積過多的脂 肪將會給生產(chǎn)者、加工者和消費者造成顯而易見的經(jīng)濟(jì)損失。同時肉種雞過肥也將會嚴(yán)重 影響產(chǎn)蛋率、受精率和孵化率，并且會誘導(dǎo)脂肪肝綜合癥的發(fā)生，從而加大了產(chǎn)蛋期的死 淘率。因此，控制脂肪在雞體內(nèi)的過多蓄積，進(jìn)一步提高肉雞的飼料轉(zhuǎn)化效率和胴體質(zhì)量 是我國急需研究解決的重大問題。

乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA?carboxylase，ACC)屬于分子間羧化轉(zhuǎn)移家族成員。 乙酰輔酶A羧化酶有兩種同型物：乙酰輔酶A羧化酶α(ACCα)和乙酰輔酶A羧化酶 β(ACCβ)。ACC可以催化乙酰輔酶A生成丙二酸單酰輔酶A，是脂肪合成的限速調(diào)節(jié)酶。 丙二酸單酰輔酶A作為長鏈脂肪酸合成的前體，在脂肪酸的合成中作為2碳單位的供體，并且 在脂肪酸的氧化中作為線粒體穿梭系統(tǒng)的調(diào)節(jié)因子，同時還可以作為一種信號分子通過調(diào) 節(jié)下丘腦來對攝食和能量平衡進(jìn)行調(diào)控。

在哺乳動物中，對兩種類型的ACC基因的功能已經(jīng)有了較為深入地研究。ACCα與 ACCβ分別位于胞質(zhì)和線粒體膜上，由他們催化產(chǎn)生的丙二酸單酰輔酶A位于兩個相對獨 立的區(qū)域，不會混合。位于胞質(zhì)中的丙二酸單酰輔酶A用于進(jìn)行脂肪酸的從頭合成，而位 于線粒體附近的丙二酸單酰輔酶A則調(diào)節(jié)肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I的活性，從而調(diào)控對脂肪 酸的氧化(Abu-Elheiga，2005)。因此，脂肪酸的合成與氧化過程不是同時發(fā)生的。在鳥 類和哺乳動物的脂肪合成組織中，ACCα基因的轉(zhuǎn)錄水平受營養(yǎng)和激素雙重調(diào)節(jié)。處于饑餓 狀態(tài)的雞其肝臟中ACCα的轉(zhuǎn)錄水平是很低的，而當(dāng)飼喂高碳水化合物、低脂肪的飼料時 ACCα基因的轉(zhuǎn)錄水平能夠提高11倍(Hillgartner等，1996)。體外培養(yǎng)原代雞胚肝細(xì)胞 時，加入激活型T3(三碘甲腺原氨酸)，能夠使ACCα基因的轉(zhuǎn)錄效率提高5-7倍(Zhang 等，2001)。Mooney等(2008)在研究山羊豆堿為什么會導(dǎo)致小鼠體重減少時發(fā)現(xiàn)，其主 要途徑為山羊豆堿能抑制ACC的活性，ACCα與ACCβ的活性降低能使脂肪合成減少，同 時脂肪酸氧化加快，從而影響小鼠的體重性狀。Liang等人(2006)的研究表明，ACCα在 脂肪代謝中具有重要的作用，ACCα功能異常可以導(dǎo)致肥胖、II型糖尿病等疾病，將ACCα 作為藥物的靶基因治療肥胖等相關(guān)疾病有著重要意義。Abu-Elheiga等(2005)指出敲除大 鼠ACCα基因后，大鼠產(chǎn)生胚胎致死現(xiàn)象，可以看出ACCα對胚胎的早期發(fā)育非常重要。

Takai等人(1987)在雞的肝臟組織中分離出ACCα。ACCα基因位于雞19號染色體，CDS 全長6974bp，DNA序列由50個外顯子和49個內(nèi)含子組成，全長92409bp，編碼2324個氨基酸。 雞、小鼠、人的ACCα的氨基酸序列非常相似，其同源性約為90％。在哺乳動物中，ACCα基因 主要在肝臟和脂肪組織中表達(dá)。本課題組的研究表明ACCα基因在雞腹脂、肝臟、脾臟、腺胃、 肌胃中均有表達(dá)。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種分子生物學(xué)技術(shù)，即采用PCR-RFLP的方法檢測雞ACCα 基因外顯子19中G→A變異位點，操作簡單、費用低、精確度高，可進(jìn)行快速檢測的一種 用ACCα基因預(yù)示和鑒定雞腹脂量的分子標(biāo)記方法。

本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的：

1、根據(jù)雞ACCα基因序列設(shè)計一對引物G2292AF和G2292AR，其中下游引物3’端最 后一個堿基G為人為設(shè)計堿基(不與基因組序列配對)，目的是為了在突變堿基附近產(chǎn)生一 個強制性酶切位點：