[發明專利]高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術

無效

• 申請號: 200910071495.6
• 申請日: 2009-03-05
• 公開（公告）號: CN101824453A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 趙新淮;吳丹
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術，涉及以酪蛋白為主要原料，利用木瓜蛋白酶為催化劑，通過第一步酪蛋白水解制備酪蛋白抗氧化肽和第二步酪蛋白抗氧化肽的進一步處理，兩步法制備高活性酪蛋白抗氧化肽。所制備的高活性酪蛋白抗氧化肽可以應用于食品加工和保健品的生產。

背景技術

抗氧化肽是通過天然蛋白質的酶水解處理，從而制備出的具有抗氧化活性的蛋白質水解物。酪蛋白是抗氧化肽制備中蛋白質的主要來源之一。由于抗氧化肽具有分子量小、易消化吸收、安全可靠、不引起過敏反應等特點，因此抗氧化肽在食品加工、保健品生產等許多領域具有良好的前景。

抗氧化肽的一般制備主要是通過蛋白質的直接酶水解而達到，抗氧化肽的活性可以通過肽的分離、提純等處理進一步提高，但處理技術復雜、操作困難。本發明以酪蛋白、木瓜蛋白酶為基本原料，兩步法制備高活性酪蛋白抗氧化肽。第一步采用木瓜蛋白酶催化酪蛋白水解，制備酪蛋白抗氧化肽；第二步再次利用木瓜蛋白酶對酪蛋白抗氧化肽進行處理，制備高活性酪蛋白抗氧化肽。兩步法制備出的高活性酪蛋白抗氧化肽，不需要肽的分離或純化處理，并且產物的活性提高。因此，高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術，可以作為一種新的技術手段應用于高活性酪蛋白抗氧化肽的生產。

發明內容

本發明的目的是以酪蛋白和木瓜蛋白酶為基本原料，第一步通過木瓜蛋白酶催化酪蛋白的水解制備出酪蛋白抗氧化肽，第二步再次利用木瓜蛋白酶對酪蛋白抗氧化肽進行處理，從而制備出一種高活性酪蛋白抗氧化肽。

本發明的目的通過如下技術方案實現：

(一)酪蛋白抗氧化肽的制備方法：

(1)將酪蛋白用蒸餾水進行溶脹，同時不斷攪拌直到酪蛋白完全溶解，配制質量體積比為4％～6％(W/V)的酪蛋白溶液；

(2)用1mol·L^-1的NaOH溶液將酪蛋白溶液的pH值調至5.0～8.0；

(3)向上述調節完pH值的酪蛋白溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為每克酪蛋白300U～600U酶活力單位；

(4)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白溶液放入40℃～50℃水浴中進行加熱、水解，攪拌器攪拌，攪拌轉速為每分鐘30轉～90轉，水解進行1小時～5小時；

(5)用1mol·L^-1HCl溶液將水解的酪蛋白溶液pH值調至4.6，然后升溫至100℃加熱20分鐘進行酶滅活；

(6)將上述水解的酪蛋白溶液以每分鐘5000轉離心處理20分鐘，棄去殘渣，收集上清液；

(7)把所得到的上清液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時冷凍干燥機的擱板加熱溫度為20℃，干燥箱壓力降至6帕～8帕時取出冷凍干燥物，得到酪蛋白抗氧化肽。噴霧干燥時，流量為每小時150千克、進口溫度為160℃～200℃、出口溫度為70℃～80℃，得到酪蛋白抗氧化肽。

在第一步制備中，酪蛋白溶液的質量體積比最好是5％(W/V)，溶液的pH值最好調節至6.5，木瓜蛋白酶添加量最好是每克酪蛋白500U酶活力單位，反應溫度最好是45℃，攪拌轉速最好是每分鐘60轉，水解時間最好是2小時。

(二)高活性酪蛋白抗氧化肽的制備方法：

(1)將得到的酪蛋白抗氧化肽用蒸餾水溶解，配制質量體積比為30～70％(W/V)的酪蛋白抗氧化肽溶液；

(2)向上述酪蛋白抗氧化肽溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為每克酪蛋白抗氧化肽300U～600酶活力單位；

(3)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白抗氧化肽溶液在13℃～47℃的條件下攪拌進行處理，攪拌速度為每分鐘60轉～100轉，處理時間為1小時～10小時；然后升溫至100℃加熱20分鐘進行酶滅活；

(4)將處理后的酪蛋白抗氧化肽溶液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時冷凍干燥機的擱板加熱溫度為20℃，干燥箱壓力降至6帕～8帕時，取出冷凍干燥物，得到高活性酪蛋白抗氧化肽。噴霧干燥時，流量為每小時150千克、進口溫度為160℃～200℃、出口溫度為70℃～80℃，得到高活性酪蛋白抗氧化肽。

在第二步制備中，酪蛋白抗氧化肽的質量體積比最好是50％(W/V)，木瓜蛋白酶添加量最好是每克酪蛋白抗氧化肽500U酶活力單位，處理溫度最好是30℃，攪拌轉速最好是每分鐘80轉，處理時間最好是5.6小時。

本發明以酪蛋白、木瓜蛋白酶為基本原料，兩步法制備出高活性酪蛋白抗氧化肽。本發明制備的抗氧化肽活性更高，具有對清除2，2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基能力有顯著提高的優點。

具體實施方式