[發明專利]獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸人工抗原及其特異性抗體

無效

• 申請號: 200910070867.3
• 申請日: 2009-10-19
• 公開（公告）號: CN102040661A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 王碩;江月明;王俊平;張燕
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K16/44;C07D499/46;C07D499/04;C07K1/113;C12N9/96
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1.獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸人工抗原和抗體其特征在于使用分子式為

的(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環[3，2，0]庚烷-2-甲酸作為半抗原與鑰孔血藍蛋白連接合成人工抗原，與辣根過氧化物酶連接合成酶標抗原，其中人工抗原再經過免疫新西蘭大白兔，取血，分離出抗血清純化制得抗體；

2.權利要求1所述的獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸半抗原的制備方法，其特征在于是用下述步驟制得：取(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環[3，2，0]庚烷-2-甲酸鉀鹽1.500g，加入4.0ml?1M鹽酸，得到半抗原(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環[3，2，0]庚烷-2-甲酸白色固體，雙蒸水洗滌并干燥即可得到半抗原；

3.權利要求1所述的獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸人工抗原的制備方法，其特征在于是用下述步驟制得：取權利要求2所得白色固體0.5000g溶于2ml四氫呋喃中，加入0.1500gN-羥基琥珀酰亞胺和0.5000gN，N-二環己基碳二亞胺，在22-25℃下，攪拌反應過夜，然后放于4℃冰箱內18小時，離心除去沉淀，將上層活化酯液加入到pH?7.0溶有10mg鑰孔血藍蛋白的2mlPBS溶液中，經攪拌后于4℃下反應5小時，將反應液裝入透析袋，4℃下、在pH?7.4的PBS中透析三天即可得到人工抗原；

4.權利要求1所述的獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸酶標抗原的制備方法，其特征在于是用下述步驟制得：取權利要求2所合成的半抗原1.9mg溶于2ml二甲基甲酰胺配成溶液A，0.54mg辣根過氧化物酶溶于2ml?pH?7.4的0.2mol/L磷酸緩沖液中配成溶液B，然后在冰浴下將溶液A緩慢的加入溶液B中，經攪拌后在4℃下反應過夜，最后將反應液置入透析袋中，在4℃下用pH7.4的0.2mol/L磷酸緩沖液透析三天即可得到酶標抗原，用于顯色反應；

5.權利要求1所述的獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸抗體的制備方法，其特征在于是用下述步驟制得：

免疫動物選用雌性新西蘭大白兔，免疫方法采用皮下和肌肉注射法，初免后進行四次加強免疫，加強免疫分別于初次免疫后2周、4周和6周后免疫三次，此后間隔一個月，進行第五次免疫，9天后由兔子的耳緣靜脈取血，進行效價檢測，具體做法是：

初次免疫：取1mg按照權利要求3所述方法合成的人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏完全佐劑等體積所配制的溶液中，進行動物免疫；

加強免疫：用0.5mg上述人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏不完全佐劑等體積所配制的溶液，進行動物免疫；

抗體純化：定時監測動物抗體效價，當抗體對一定的包被抗原達到適宜效價時，采集血液，并離心獲得抗血清，使用G-Sepharose蛋白親和層析柱對抗血清進行純化，獲得抗獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸的特異性抗體。