[發明專利]獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸人工抗原及其特異性抗體

無效

• 申請號: 200910070867.3
• 申請日: 2009-10-19
• 公開（公告）號: CN102040661A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 王碩;江月明;王俊平;張燕
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K16/44;C07D499/46;C07D499/04;C07K1/113;C12N9/96
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技術領域

本發明屬于小分子化合物(分子量小于1000道爾頓)免疫化學和殘留分析技術領域；涉及有機合成，免疫化學，生物化學及物化測試技術等；特別涉及具有涉及具有氫化噻唑環與β-內酰胺環并合的雜環分子結構的青霉素類獸藥青霉素G降解物芐青霉噻唑酸小分子化合物人工半抗原、特異性抗原的設計合成。

背景技術

青霉素G(亦稱芐青霉素)是青霉素類抗生素的一種，青霉素類抗生素是進入臨床應用最早的一類抗生素，也是我國生產量最大、使用量最多的抗生素。青霉素類抗生素已經成為治療奶牛和其他可食性動物疾病最常用的藥物，但由于用藥的不規范和奶樣收集的不當，致使動物源性食品中青霉素類藥物殘留現象嚴重。青霉素類藥物在體內殘留會產生嚴重的過敏反應，且過敏反應率高居各類藥物之首。由于青霉素易在β-內酰胺酶作用下降解為青霉噻唑酸，使青霉素失去抗菌活性，這使現有的檢測方法無法檢測出青霉素殘留，更加助長了牛奶生產中β-內酰胺類抗生素的濫用，加速了耐藥菌的傳播，嚴重威脅了中國奶業的長期發展。為此，對青霉素殘留的限制也因此越來越嚴格，并且對分析測定對象、種類、數量、范圍、指標等諸方面，都提出新的要求和更高的標準。中國農業部發布的動物性食品中獸藥最高殘留限量，對青霉素G的規定：肌肉≤50μg/kg，脂肪≤50μg/kg，肝≤50μg/kg，腎≤50μg/kg，奶≤4μg/kg，雖然并沒有對芐青霉噻唑酸作出相應規定，但其造成的危害不容忽視。分子量小于1000道爾頓的小分子有毒化學品，如農藥、獸藥及其代謝產物，其傳統的殘留分析主要是依靠氣相色譜、液相色譜或色譜-質譜聯用等分析手段。這些理化分析方法，繁瑣復雜、成本較高、分析速度慢，難以滿足實際分析的需要，因此迫切需要開發簡便、快速、靈敏的分析技術。

但是與大分子不同，小分子化合物免疫分析有自身特點：

(1)小分子化合物〔MW≤1000dolton〕一般不具有免疫原性，不能直接免疫動物產生特異性抗體、必須合成突出分子立體結構特異性部位的半抗原，并與大分子載體連接構成接合物，才能免疫動物產生針對這一目標小分子化合物的特異性抗體。這種半抗原與大分子載體的結合物稱為人工抗原。人工抗原的制備不是任意的，包括結合位點、結合方式、載體種類、以及半抗原與目標分析物任何結構上的差異如大小、形狀、成份、構型、構象、極性、電子云密度等等在內的諸因素，都可能極大地影響著相應抗體的性質，因此它們是決定產生其特異性抗體和建立免疫分析方法的關鍵。

(2)雖然小分子化合物不具有免疫原性，但具有反應原性，即具有與相應抗體發生免疫學反應的能力，并可體外定量進行，遵循質量作用定律。

(3)基于抗原抗體免疫反應檢測小分子化臺物的分析技術，目前多采用酶聯免疫分析(ELISA)。利用酶促反應顯示抗原抗體的定量結合，操作簡單，又具有相當的靈敏度，近年來發展很快。80年代以來發展起來的獸藥ELISA和簡易酶免疫EIA技術，使獸藥殘留分析在方法上獲得更大的生命力；對使用快速分析樣本基質過于復雜，用普通理化方法難以分析的獸藥殘留，具有相當的應用價值。

免疫分析技術被引入獸藥殘留分折領域，成為一種最有發展和應用潛力的定量分析技術之一，受到廣泛的重視。該技術研究的關鍵是半抗原的分子設計、合成和人工全抗原及抗體的制備。因此，目標分析物分子免疫學特性，以及如何通過化學或生化技術突出和利用這些特性，是該領域重要的研究內容。這一技術目前已成為微量分析研究的一個嶄新領域，可與傳統分析方法并列作為一項新的分析途徑。

小分子化合物(分子量小于1000道爾頓)，依靠免疫學、免疫化學基本原理和生物技術手段。該技術研究的關鍵是半抗原的分子設計、合成和人工全抗原及抗體的制備。因此，目標分析物分子免疫學特性，以及如何通過化學或生化技術突出和利用這些特性，是該領域重要的研究內容。這一技術目前已成為微量分析研究的一個嶄新領域，可與傳統分析方法并列作為一項新的分析途徑。目前青霉素G及其降解物芐青霉噻唑酸人工抗原尚未見報道。

發明內容

需要解決的科學問題：針對上述情況，當前急需一種簡易快速有效地檢測青霉素G及其降解物芐青霉噻唑酸的方法。本發明的目的是通過設計合成具有6-氨基己酸分子結構和β-內酰胺環分子結構的青霉素類獸藥青霉素G及其降解物芐青霉噻唑酸的半抗原和人工抗原，制備針對青霉素G及其降解物芐青霉噻唑酸的特異性抗體；獨特之處在于突出了這類獸藥分子特異性抗原決定簇，又克服了化學合成的困難，免疫動物誘導產生親合性很高的特異性抗體。

技術方案