[發(fā)明專利]利用基因工程菌株耦合發(fā)酵合成GDP-甘露糖體系的構(gòu)建方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910070580.0
• 申請(qǐng)日: 2009-09-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101671692A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李玉;孔董俊;王春霞;路福平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12P19/32;C12R1/19
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王來(lái)佳

1、一種利用基因工程菌株耦合發(fā)酵合成GDP-甘露糖體系的構(gòu)建方法，其特征在于：構(gòu)建方法包括以下步驟：

(1)基因擴(kuò)增：根據(jù)大腸桿菌K-12基因組中己糖激酶基因glk、磷酸甘露糖變位酶基因manB和甘露糖-1-磷酸鳥(niǎo)苷酰轉(zhuǎn)移酶基因manC的序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增出大腸桿菌中的三個(gè)酶基因序列；

(2)重組質(zhì)粒的構(gòu)建：用酶切連接的方法分別將上述三種目的基因與載體pET-22b相連，得到攜帶酶基因的重組表達(dá)載體，并進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證；

(3)基因工程菌株的構(gòu)建：將上述驗(yàn)證正確的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入宿主菌株BL21(DE3)中，得到含有重組質(zhì)粒的三種基因工程菌株；

(4)混合發(fā)酵合成GDP-甘露糖：三個(gè)基因工程菌株的混合發(fā)酵，通過(guò)改變細(xì)胞通透性使工程菌株的產(chǎn)物作用于甘露糖合成GDP-甘露糖。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用基因工程菌株耦合發(fā)酵合成GDP-甘露糖體系的構(gòu)建方法，其特征在于：所述步驟(3)的三種基因工程菌株分別為：BL21(DE3)/pET-22b-glk、BL21(DE3)/pET-22b-manB和BL21(DE3)/pET-22b-manC。

3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用基因工程菌株耦合發(fā)酵合成GDP-甘露糖體系的構(gòu)建方法，其特征在于：所述步驟(4)混合發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分為g/L：BL21(DE3)/pET-22b-gL濕重25；BL21(DE3)/pET-22b-manB濕重15；BL21(DE3)/pET-22b-manC濕重25；甘露糖30；植酸5；KH₂PO₄?25；MgSO₄.7H₂O?5；ATP?5；Nymeen?S-215?4。