[發明專利]一種豬胸膜肺炎放線桿菌的重組外膜蛋白、編碼基因、表達載體及其制備方法

無效

• 申請號: 200910070452.6
• 申請日: 2009-09-16
• 公開（公告）號: CN101691396A
• 公開（公告）日: 2010-04-07
• 發明（設計）人: 楊建德;劉燕霏;徐軍;李本強;馬吉飛;楊升;楊百亮;張安國
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;C12N15/63;C12N15/70;C12P21/02;C12R1/01;C12R1/19
• 代理公司: 天津市鼎和專利商標代理有限公司 12101
• 代理人: 王淦緒

1.一種豬胸膜肺炎放線桿菌的重組外膜蛋白，其特征在于，具有(a)或(b)的重組外膜蛋白：

(a)由SEQ?NO.2所示氨基酸序列的蛋白質；

(b)在(a)中的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具免疫活性的由(a)衍生的蛋白質。

2.如權利要求1所述的豬胸膜肺炎放線桿菌的重組外膜蛋白的編碼基因，其特征在于，是下列核苷酸序列之一：

(1)SEQ?NO.1所示的DNA序列；

(2)SEQ?NO.1限定的DNA序列具有90％以上的同源性，且編碼相同功能的蛋白質的DNA系列。

3.含有權利要求2所述的基因表達載體。

4.如權利要求1所述的豬胸膜肺炎放線桿菌的重組外膜蛋白的制備方法，包括以下步驟：擴增SEQ?NO.1中的基因；將目的片段與載體相連轉入大腸桿菌；誘導表達目的得到目的蛋白；重組蛋白的純化與復性。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：擴增序列外膜基因所用的引物是，上游引物5’TTACTCGAGGGACGGTTCGCTTGAACAAG3’，下游引物；5，-CCCGGATCCCTATCTTCTATATTTACCCGCC-3’；得到目的片段與載體pET15b經酶切后連接，轉入大腸桿菌，提取質粒經鑒定后轉入表達型菌體BL21(DE3)；挑取陽性菌落，經IPTG誘導表達得到目的蛋白；收集誘導的菌體經超聲波裂解后經過Talon試劑盒純化，儲存8M的尿素中。