[發(fā)明專利]定量檢測人血清TRAb板式熒光酶免方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910070407.0
• 申請日: 2009-09-11
• 公開（公告）號: CN101692085A
• 公開（公告）日: 2010-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方佩華;李寧;陳慧;王少艷;譚建
• 申請（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學總醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/64;G01N33/564;C07K14/72
• 代理公司: 天津佳盟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12002
• 代理人: 廖曉榮

1.一種定量檢測人血清TRAb板式熒光酶免方法，其特征在于用重組人促甲狀激素受體hTSHR膜外區(qū)氨基端蛋白做抗原包被多孔板，用含1-5％BSA的PBST封閉；然后再以多孔板做載體加入抗hTSHR第一抗體或標準品、再依次酶標第二抗體、熒光底物和終止液，最后在熒光發(fā)光分析儀上測定熒光強度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測人血清TRAb板式熒光酶免方法，其特征在于所述抗原重組人促甲狀激素受體hTSHR膜外區(qū)氨基端蛋白的氨基酸序列為：

Met?Gly?Cys?Ser?Ser?Pro?Pro?Cys?Glu?Cys?His?Gln?Glu?Glu?Asp?Phe??16AA

1????????????????????????7???????????????????????13

Arg?Val?Thr?Cys?lys?Asp?Ile?Gln?Arg?Ile?Pro?Ser?Leu?Pro?Pro?Ser??32AA

?????????19??????????????????????25??????????????????????31

Thr?Gln?Thr?Leu?lys?Leu?Ile?Glu?Thr?His?Leu?Arg?Thr?Ile?Pro?Ser??48AA

?????????????????37??????????????????????43

His?Ala?Phe?Ser?Asn?Leu?Pro?Asn?Ile?Ser?Arg?Ile?Tyr?Val?Ser?Ile??64AA

49???????????????????????55??????????????????????61

Asp?Val?Thr?Leu?Gln?Gln?Leu?Glu?Ser?His?Ser?Phe?Tyr?Asn?Leu?Ser??80AA

?????????67??????????????????????73??????????????????????79

lys?Val?Thr?His?Ile?Glu?Ile?Arg?Asn?Thr?Arg?Asn?Leu?Thr?Tyr?Ile??96AA

?????????????????85??????????????????????91

Asp?Pro?Asp?Ala?Leu?lys?Glu?Leu?Pro?His?Leu?lys?Phe?Leu?Gly?Ile?112AA

97??????????????????????103?????????????????????109

Phe?Asn?Thr?Gly?Leu?lys?Met?Phe?Pro?Asp?Leu?Thr?lys?Val?Tyr?Ser?128AA

????????115?????????????????????121?????????????????????127

Thr?Asp?Ile?Phe?Phe?Ile?Leu?Glu?Ile?Thr?Asp?Asn?Pro?Tyr?Met?Thr?144AA

????????????????133?????????????????????139

Ser?Ile?Pro?Val?Asn?Ala?Phe?Gln?Gly?Leu?????????????????????????154AA

145?????????????????????151

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測人血清TRAb板式熒光酶免方法，其特征在于所述多孔板抗原包被是：在多孔板上每孔加16ng-200ng/100μl?hTSHR，4℃過夜，然后漂洗，再用含1-5％BSA的PBST封閉液封閉，每孔加100μl，25-37℃溫育1小時，再用PBST漂洗。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測人血清TRAb板式熒光酶免方法，其特征在于所述加入抗hTSHR第一抗體是：用稀釋液1∶50-1∶200稀釋的人血清標本或已知量標準物在多孔板上每孔加100μl，25-37℃溫育1小時后用PBST漂洗。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測人血清TRAb板式熒光酶免方法，其特征在于所述加入酶標第二抗體是：在多孔板上每孔加1∶5000-1∶25000稀釋的堿性磷酸酶標記的羊抗人IgG?100μl，25-37℃溫育1小時后用PBST漂洗，再用PBS漂洗。