[發(fā)明專利]一種新型嗜熱鏈球菌細(xì)菌素的生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910069707.7
• 申請日: 2009-07-13
• 公開（公告）號(hào): CN101608201A
• 公開（公告）日: 2009-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚之磊;李琳;賈士儒;王國良;范寶慶;曹美娜;莫治文
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/02
• 分類號(hào): C12P21/02;C07K14/315;C07K1/14;A23L3/3463;A23C3/08;A23C13/16;A23C15/20;A23C19/11;A23B4/20;A23L2/44;A23B7/154;A21D2/26;A61K38/00
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1.一種采用發(fā)酵法生產(chǎn)嗜熱鏈球菌細(xì)菌素的方法，其特征在于：所述方法中的菌種為嗜 熱鏈球菌(Streptococcus?thermophilus)CGMCC1.1864，培養(yǎng)溫度為28～37℃，培養(yǎng)基為改 良MRS培養(yǎng)基，其組成為：葡萄糖10～30g／L、蛋白胨1～10g/L、牛肉膏1～10g/L、酵母膏 0.5～5g／L、K₂HPO₄·3H₂O0.1～2g／L、乙酸鈉0.5～5g/L、檸檬酸銨0.1～2g／L、MgSO₄·7H₂O 0.01～0.58g/L、MnSO₄0.01～0.25g／L、吐溫-800.01～0.1mL／L；培養(yǎng)方式為三角瓶靜置培養(yǎng)或 低速搖床振蕩培養(yǎng)，或發(fā)酵罐培養(yǎng)；培養(yǎng)時(shí)間12～36h，培養(yǎng)至菌體密度為10⁶～10⁹cfu／mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，將發(fā)酵得到的嗜熱鏈球菌細(xì)菌素進(jìn)行純化的方法，分離純化 的主要步驟包括：pH吸附釋放法、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮、凝膠層析。

3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中pH吸附釋放法的具體步驟為：將權(quán)利要求1得到的發(fā) 酵液調(diào)節(jié)pH5.0～6.5，4～30℃振蕩2～12h使嗜熱鏈球菌細(xì)菌素充分吸附到菌體上，離心收集 吸附了嗜熱鏈球菌素的菌體，用5mmol／L?pH6.0的磷酸鈉溶液洗滌菌體1～3次，最后將菌體 懸浮于100mmol／L?pH2.0的NaCl溶液中，振蕩5～12h后離心去除菌體。

4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮的具體步驟為：取用NaCl溶液振蕩離心 后上清液調(diào)節(jié)pH6.0，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮10～20倍。

5.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中凝膠層析的具體步驟為：將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后所得細(xì)菌素 粗提液采用Sephadex?G-25層析柱進(jìn)一步除鹽和雜蛋白，用去離子水進(jìn)行洗脫，流速為0。5～2 mL／min，收集活性組分。