[發明專利]15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制備方法

有效

• 申請號: 200910069539.1
• 申請日: 2009-07-03
• 公開（公告）號: CN101597634A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 毛淑紅;路福平;杜連祥;蔣彥潔;別松濤;王春霞
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12P33/12
• 分類號: C12P33/12;C12R1/80
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其是一種15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制 備方法。

背景技術

孕二烯酮是迄今為止孕激素活性最強的甾體激素類藥物，是新一代避孕藥的主 要成分之一，具有重要的醫用價值。因其孕激素活性高、無副作用、吸收快、無殘 留、避孕效果可靠及良好的抑腫瘤作用，成為目前最為理想的口服避孕藥的首選成 分。

15α-羥基左旋乙基甾烯雙酮是合成孕二烯酮的關鍵中間體，工業上主要采用化 學方法合成15α-羥基左旋乙基甾烯雙酮，該類方法步驟繁瑣，成本較高，不適于藥 物的推廣使用。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種利用雷斯青霉催化甾體化合 物左旋乙基甾烯雙酮生成15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制備方法，該方法具 有目標產物轉化率高、純化過程簡單的優點。

本發明實現目的的技術方案是：

一種15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制備方法，步驟是：

(1)菌懸液的制備：將雷斯青霉Penicillium?raistrickii(ATCC?10490)菌種接種于斜 面培養基，5天后，用無菌生理鹽水制備出菌懸液；

(2)一級種子培養：將菌懸液接入種子培養基培養，接種量10⁶-10⁹個/mL，培養 溫度為25-30℃，轉速80-120r/s，培養時間24-96h，得到種子培養液；

(3)二級發酵培養：將種子培養液以2-5％的接種量接入發酵罐繼續培養，發酵控 制條件為溫度25-30℃，轉速160-240r/min，通氣量為2L/min，菌體培養時間為 36-72h，得到發酵液；

(4)底物誘導：在已培養好的發酵液內加入0.1-0.3g/L的左旋乙基甾烯雙酮誘導 16-48h小時；

(5)左旋乙基甾烯雙酮轉化：加入底物進行微生物轉化，采用將左旋乙基甾烯雙 酮底物用促溶劑溶解后加入發酵液的轉化方式，轉化條件為轉速180-240r/min，轉 化溫度為25-30℃，轉化時間90-150h；

(6)萃取制備成品：料液經過濾，所得濾餅經萃取處理，即得15α羥基化左旋乙 基甾烯雙酮。

而且，所述促溶劑包括甲醇、乙醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇、聚乙二醇、 苯甲醇二甲亞砜、二甲基甲酰胺、丙酮、二甲基乙酰胺、乳酸乙酯、油酸乙酯，促 溶劑濃度1-6％。

而且，所述步驟(5)中濾餅的萃取方法是將濾餅烘干后，以與原發酵液1∶10-1∶ 20的體積比采用萃取劑萃取。

而且，所述萃取劑是乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙酮、正己烷。

本發明的優點和有益效果為：

1、本發明方法是在雷斯青霉的發酵液中，利用雷斯青霉菌體Penicillium raistrickii(ATCC?10490)中所含的羥化酶，催化左旋乙基甾烯雙酮的15α位發生羥基化 反應，生成15α-羥基左旋乙基甾烯雙酮，通過優化發酵條件及轉化工藝，有效提高 轉化率。

2、本發明采用的微生物轉化方法具有很高的立體選擇性、區域選擇性和化學選 擇性，提高了底物轉化率，在3‰投料量情況下，其轉化率最高可達90％以上，簡 化了目標產物制備與純化的過程，避免大量有機溶劑的使用，既符合環保要求，又 降低生產成本。

3、本發明15α羥基左旋乙基甾烯雙酮制備過程中無需加入昂貴的金屬催化劑， 降低了生產成本；本方法各步驟反應條件溫和，轉化裝置簡單，適合工業化生產。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發明作進一步詳述，以下實施例是描述性的，不是限 定性的，不能以此限定本發明的保護范圍。

實施例1：

一種15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制備方法，本實施例采用促溶劑1％ 二甲基甲酰胺的15α羥化反應，步驟是：

(1)菌懸液的制備：將雷斯青霉Penicillium?raistrickii(ATCC?10490)菌種接種于斜 面培養基，5天后，用無菌生理鹽水制備出菌懸液；

(2)一級種子培養：將菌懸液接入種子培養基培養，接種量10⁶/mL，培養溫度為 28℃，轉速120r/m，培養時間24h，得到適合接種的種子培養液；