[發明專利]15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制備方法

有效

• 申請號: 200910069539.1
• 申請日: 2009-07-03
• 公開（公告）號: CN101597634A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 毛淑紅;路福平;杜連祥;蔣彥潔;別松濤;王春霞
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12P33/12
• 分類號: C12P33/12;C12R1/80
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

1.一種15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制備方法，其特征在于：制備 方法的步驟是；

(1)菌懸液的制備：將雷斯青霉Penicillium?raistrickii?ATCC?10490菌種接種于 斜面培養基，5天后，用無菌生理鹽水制備出菌懸液；

(2)一級種子培養：將菌懸液接入種子培養基培養，接種量10⁶-10⁹個/mL，培 養溫度為25-30℃，轉速80-120r/s，培養時間24-96h，得到種子培養液；

(3)二級發酵培養：將種子培養液以2-5％的接種量接入發酵罐繼續培養，發 酵控制條件為溫度25-30℃，轉速160-240r/min，通氣量為2L/min，菌體培養時 間為36-72h，得到發酵液；

(4)底物誘導；在已培養好的發酵液內加入0.1-0.3g/L的左旋乙基甾烯雙酮誘 導16-48h小時；

(5)左旋乙基甾烯雙酮轉化：加入底物進行微生物轉化，采用將左旋乙基甾烯 雙酮底物用促溶劑溶解后加入發酵液的轉化方式，轉化條件為轉速 180-240r/min，轉化溫度為25-30℃，轉化時間90-150h；

(6)萃取制備成品：料液經過濾，所得濾餅經萃取處理，即得15α羥基化左旋 乙基甾烯雙酮，所述促溶劑包括甲醇、乙醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇、聚乙 二醇、苯甲醇二甲亞砜、二甲基甲酰胺、丙酮、二甲基乙酰胺、乳酸乙酯、油酸 乙酯，促溶劑濃度1-6％。

2.根據權利要求1所述的15α羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物制備方法， 其特征在于：所述步驟(6)中濾餅的萃取方法是將濾餅烘干后，以與原發酵液1∶ 10-1∶20的體積比采用萃取劑萃取。