[發(fā)明專利]αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體及試劑盒和試紙條無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910068653.2 | 申請(qǐng)日： | 2009-04-28 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101531716A | 公開(kāi)（公告）日： | 2009-09-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 龐廣昌;張濤;趙越;艾麗萍;方素云;胡媧;李丹 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 天津商業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C07K16/18 | 分類號(hào)： | C07K16/18;C07K1/30;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/558 |
| 代理公司： | 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 | 代理人： | 肖莉麗 |
| 地址： | 300134*** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | sub s1 蛋白 特異性 抗體 試劑盒 試紙 | ||
1、一種兔抗αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體，其特征在于，該αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體通過(guò)下述方法制備：
(1)動(dòng)物的飼養(yǎng)與處理：新西蘭大白兔，預(yù)養(yǎng)一周后，觀察無(wú)異樣，采集兔耳中央動(dòng)脈血樣2～3ml，將收集的血樣分離血清，作為抗血清檢測(cè)時(shí)的陰性對(duì)照血清；
(2)初次免疫：兔子在免疫前進(jìn)行編號(hào)；取αs1-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品用生理鹽水溶解，配成濃度為2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液，取κ-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品用生理鹽水溶解，配成濃度為2mg/ml的κ-酪蛋白溶液；將得到的αs1-酪蛋白溶液與完全福氏佐劑按照體積比為1:1的比例混合得到αs1-酪蛋白溶液；將得到的κ-酪蛋白溶液與完全福氏佐劑按照體積比為1:1的比例混合得到κ-酪蛋白混合溶液，用兩只注射器分別抽取αs1-酪蛋白溶液和κ-酪蛋白溶液相對(duì)反復(fù)抽送直至兩種酪蛋白混合溶液完全乳化得到免疫注射液，對(duì)編號(hào)的新西蘭大白兔進(jìn)行腹部皮下5點(diǎn)免疫注射，每點(diǎn)0.2ml；
(3)加強(qiáng)免疫：對(duì)編號(hào)的新西蘭大白兔初次免疫21天后，進(jìn)行第一次加強(qiáng)免疫，第一次加強(qiáng)免疫的方法為：分別用步驟2中制備的濃度為2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液和濃度為2mg/ml的κ-酪蛋白溶液采用耳緣靜脈注射免疫，免疫劑量分別為1ml/只；以后每隔7天加強(qiáng)免疫1次，免疫劑量與免疫方法與第一次加強(qiáng)免疫相同，共進(jìn)行4次加強(qiáng)免疫；在每次加強(qiáng)免疫后的7～10天抽取靜脈血，分離血清，用ELISA法測(cè)定抗血清的效價(jià)。
(4)當(dāng)用ELISA法測(cè)定抗血清的效價(jià)達(dá)到1:2700以上時(shí)分別經(jīng)心臟采血收集αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗血清；
(5)用硫酸氨沉淀法對(duì)αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白多克隆抗血清進(jìn)行分離純化，得到αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體。
2、一種含有權(quán)利要求1所述的αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中檢測(cè)樣品的特異性蛋白含量的檢測(cè)抗體為兔抗αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體，標(biāo)記酶為過(guò)氧化物酶，標(biāo)記抗體為羊抗兔抗體，其中兔抗αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體通過(guò)下述方法制備：
(1)動(dòng)物的飼養(yǎng)與處理：新西蘭大白兔，預(yù)養(yǎng)一周后，觀察無(wú)異樣，采集兔耳中央動(dòng)脈血樣2～3ml，將收集的血樣分離血清，作為抗血清檢測(cè)時(shí)的陰性對(duì)照血清；
(2)初次免疫：兔子在免疫前進(jìn)行編號(hào)；取αs1-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品用生理鹽水溶解，配成濃度為2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液，取κ-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品用生理鹽水溶解，配成濃度為2mg/ml的κ-酪蛋白溶液；將得到的αs1-酪蛋白溶液與完全福氏佐劑按照體積比為1:1的比例混合得到αs1-酪蛋白溶液；將得到的κ-酪蛋白溶液與完全福氏佐劑按照體積比為1:1的比例混合得到κ-酪蛋白溶液，用兩只注射器分別抽取αs1-酪蛋白混合溶液和κ-酪蛋白混合溶液相對(duì)反復(fù)抽送直至兩種酪蛋白混合溶液完全乳化得到免疫注射液，對(duì)編號(hào)的新西蘭大白兔進(jìn)行腹部皮下5點(diǎn)免疫注射，每點(diǎn)0.2ml；
(3)加強(qiáng)免疫：對(duì)編號(hào)的新西蘭大白兔初次免疫21天后，進(jìn)行第一次加強(qiáng)免疫，第一次加強(qiáng)免疫的方法為：分別用步驟2中制備的濃度為2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液和濃度為2mg/ml的κ-酪蛋白溶液采用耳緣靜脈注射免疫，免疫劑量分別為1ml/只；以后每隔7天加強(qiáng)免疫1次，免疫劑量與免疫方法與第一次加強(qiáng)免疫相同，共進(jìn)行4次加強(qiáng)免疫；在每次加強(qiáng)免疫后的7～10天抽取靜脈血，分離血清，用ELISA法測(cè)定抗血清的效價(jià)；
(4)當(dāng)用ELISA法測(cè)定抗血清的效價(jià)達(dá)到1:2700以上時(shí)分別經(jīng)心臟采血收集αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗血清；
(5)用硫酸氨沉淀法對(duì)αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白多克隆抗血清進(jìn)行分離純化，得到αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體。
3、一種含有權(quán)利要求1所述的αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體的金標(biāo)免疫層析試紙條，包括吸水濾紙、醋酸纖維膜、膠體金結(jié)合墊、玻璃纖維，其特征在于：所述膠體金結(jié)合墊吸附有αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體，所述αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體通過(guò)下述方法制備：
(1)動(dòng)物的飼養(yǎng)與處理：新西蘭大白兔，預(yù)養(yǎng)一周后，觀察無(wú)異樣，采集兔耳中央動(dòng)脈血樣2～3ml，將收集的血樣分離血清，作為抗血清檢測(cè)時(shí)的陰性對(duì)照血清；
(2)初次免疫：兔子在免疫前進(jìn)行編號(hào)；取αs1-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品用生理鹽水溶解，配成濃度為2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液，取κ-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品用生理鹽水溶解，配成濃度為2mg/ml的κ-酪蛋白溶液；將得到的αs1-酪蛋白溶液與完全福氏佐劑按照體積比為1:1的比例混合得到αs1-酪蛋白溶液；將得到的κ-酪蛋白溶液與完全福氏佐劑按照體積比為1:1的比例混合得到κ-酪蛋白溶液，用兩只注射器分別抽取αs1-酪蛋白混合溶液和κ-酪蛋白混合溶液相對(duì)反復(fù)抽送直至兩種酪蛋白混合溶液完全乳化得到免疫注射液，對(duì)編號(hào)的新西蘭大白兔進(jìn)行腹部皮下5點(diǎn)免疫注射，每點(diǎn)0.2ml；
(3)加強(qiáng)免疫：對(duì)編號(hào)的新西蘭大白兔初次免疫21天后，進(jìn)行第一次加強(qiáng)免疫，第一次加強(qiáng)免疫的方法為：分別用步驟2中制備的濃度為2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液和濃度為2mg/ml的κ-酪蛋白溶液采用耳緣靜脈注射免疫，免疫劑量分別為1ml/只；以后每隔7天加強(qiáng)免疫1次，免疫劑量與免疫方法與第一次加強(qiáng)免疫相同，共進(jìn)行4次加強(qiáng)免疫；在每次加強(qiáng)免疫后的7～10天抽取靜脈血，分離血清，用ELISA法測(cè)定抗血清的效價(jià)；
(4)當(dāng)用ELISA法測(cè)定抗血清的效價(jià)達(dá)到1:2700以上時(shí)分別經(jīng)心臟采血收集αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗血清；
(5)用硫酸氨沉淀法對(duì)αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白多克隆抗血清進(jìn)行分離純化，得到αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特異性抗體。
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