[發明專利]一種祖師麻總香豆素提取物的制備方法和含量測定方法

有效

• 申請號: 200910068386.9
• 申請日: 2009-04-07
• 公開（公告）號: CN101856435A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 馬莉;韓峰;侯文彬;高靜;張新鑫;申秀萍;王圣明;胡金芳;劉靜
• 申請（專利權）人: 天津藥物研究院
• 主分類號: A61K36/83
• 分類號: A61K36/83;A61P19/02;A61P19/04;A61P29/00;G01N30/36;G01N21/31;A61K135/00;A61K125/00
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

1.一種祖師麻總香豆素提取物的制備方法，其中包括以下步驟：

(1)以祖師麻藥材為原料，水或C₁～C₅低級醇水溶液為溶劑進行提取，制得浸膏；

(2)將浸膏與固體稀釋劑混合，加入有機溶劑進行提取，回收溶劑得到固體提取物，或者將浸膏加水懸浮，加入有機溶劑萃取，回收溶劑得到固體提取物；

(3)將固體提取物加水懸浮，采用大孔吸附樹脂層析，首先以水或C₁～C₅低級醇水溶液為流動相淋洗除雜質，然后以C₁～C₅低級醇水溶液洗脫，收集洗脫液；

(4)前半部分洗脫液回收溶劑得到固體，即一部分祖師麻總香豆素提取物；后半部分洗脫液回收溶劑得到的固體加水混懸，再用有機溶劑萃取，有機層回收溶劑得到固體，即另一部分祖師麻總香豆素提取物。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中提取的方法為回流或滲漉。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中C₁～C₅低級醇水溶液的低級醇濃度為0～95％(體積/體積)，優選為30～70％(體積/體積)。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中有機溶劑為醋酸乙酯、正丁醇和/或水飽和正丁醇。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)為將浸膏與固體稀釋劑混合，加入有機溶劑進行提取，回收溶劑得到固體提取物。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中固體稀釋劑選自淀粉、微粉硅膠、硅藻土、高嶺土、活性炭和白陶土中的一種或多種。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中大孔吸附樹脂選自苯乙烯、苯乙烯-丙烯酸酯、二苯乙烯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯型樹脂中的一種或多種，例如D101、D201、HPD300、HPD400、HPD800、FL-1、FL-2和/或AB-8樹脂，優選為苯乙烯型或苯乙烯-丙烯酸酯型大孔吸附樹脂。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中淋洗除雜質使用的低級醇水溶液的低級醇濃度為0～50％(體積/體積)，優選為0～20％(體積/體積)。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中洗脫樹脂使用的低級醇水溶液的低級醇濃度為20～90％(體積/體積)，優選為20～50％(體積/體積)。

10.根據權利要求1至9中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)后半部分洗脫液萃取采用的有機溶劑為醋酸乙酯和/或正丁醇。

11.根據權利要求1至10中任一項所述的制備方法制備的祖師麻總香豆素提取物。

12.根據權利要求11所述的祖師麻總香豆素提取物，其特征在于，按提取物總重量計，所述總香豆素的含量不低于50％(重量)，例如50％～90％(重量)。

13.根據權利要求11或12所述的祖師麻總香豆素提取物，其特征在于，所述總香豆素提取物包含瑞香素、祖師麻乙素、瑞香素-8-O-葡萄糖苷和7-OH-香豆素中的一種或多種。

14.根據權利要求13所述的祖師麻總香豆素提取物，其特征在于，按提取物總重量計，所述總香豆素提取物包含瑞香素0％～50％(重量)，祖師麻乙素0％～50％(重量)，瑞香素-8-O-葡萄糖苷0％～50％(重量)，7-OH-香豆素0％～30％(重量)。

15.根據權利要求11至14中任一項所述的祖師麻總香豆素提取物的含量測定方法，其中包括以下步驟：

(1)瑞香素、祖師麻乙素、瑞香素-8-O-葡萄糖苷及7-OH-香豆素的HPLC含量測定：

精密稱取祖師麻總香豆素提取物50mg，置于50mL量瓶中，加50％(體積/體積)甲醇水溶液適量使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2mL置于10mL量瓶中，加50％(體積/體積)甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別以瑞香素、祖師麻乙素、瑞香素-8-O-葡萄糖苷及7-OH-香豆素的甲醇溶液為對照品溶液；色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，體積比為25∶75的甲醇-0.5％醋酸水溶液為流動相；檢測波長為327nm；

(2)祖師麻總香豆素的含量測定：

分別將上述供試品溶液及祖師麻乙素對照品溶液稀釋至適當體積，按照紫外-可見分光光度法，在310nm波長處測定吸收度，計算。