[發(fā)明專(zhuān)利]一種糖尿病食療酵母及其構(gòu)建方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910068037.7 | 申請(qǐng)日： | 2009-03-06 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101824388A | 公開(kāi)（公告）日： | 2010-09-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李明剛;武志強(qiáng);趙磊;廖芳;李娜;馬百成;胡曉宇;王維婧;衛(wèi)一鳴;陳苗;王瑞菊 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 南開(kāi)大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N1/19 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N1/19;C12N15/81;A61K36/064;A61P3/10;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 300071*** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 糖尿病 食療 酵母 及其 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種重組釀酒酵母，是將一種治療糖尿病的多肽——長(zhǎng)效胰高血糖樣肽-1(rolGLP-1)的編碼基因以同向串聯(lián)方式導(dǎo)入到釀酒酵母BJ2407中，得到穩(wěn)定表達(dá)rolGLP-1的菌株；所述串聯(lián)rolGLP-1基因的編碼DNA堿基序列為：
編碼的氨基酸序列通式為：[His-Ser-Glu-Gly-Thr-Phe-The-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Gln-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Asp-Gly-Arg]n，n＝1-10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組釀酒酵母，其特征在于：串聯(lián)的基因中，每個(gè)rolGLP-1基因其C端的Arg恰好是胰蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)，保證融合蛋白口服后被胰蛋白酶分解為rolGLP-1單體發(fā)揮功能。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組釀酒酵母，其特征在于：利用DNA合成技術(shù)將天然胰高血糖樣肽-1的第8、26、34位的Ala、Lys、Lys分別替換為Ser、Gln、Asp。從而消除了天然胰高血糖樣肽-1內(nèi)的二肽基肽酶(DPP?IV)和胰蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)。rolGLP-1具有如下的編碼DNA堿基序列：
10????????20?????????30?????????40?????????50?????????60?????????70?????????80?????????90
CATTCTGAGG?GAACATTCAC?ATCTGATGTA?AGTTCTTACC?TCGAGGGCCA?AGCAGCTCAA?GAATTCATCG?CTTGGCTCGT?AGATGGCCGT
GTAAGACTCC?CTTGTAAGTG?TAGACTACAT?TCAAGAATGG?AGCTCCCGGT?TCGTCGAGTT?CTTAAGTAGC?GAACCGAGCA?TCTACCGGCA
以及氨基酸序列：[His-Ser-Glu-Gly-Thr-Phe-The-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Gln-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Asp-Gly-Arg]。
4.一種構(gòu)建權(quán)利要求1所述重組釀酒酵母所需要的整合型載體的構(gòu)建方法，是通過(guò)PCR的方法分別擴(kuò)增兩段釀酒酵母核糖體RNA基因(rDNA)序列(GeneBank編號(hào)為NC001144的29813-30888以及30889-31728)，釀酒酵母乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶基因URA3(GeneBank編號(hào)為NP010893)以及來(lái)自質(zhì)粒pYX212的表達(dá)元件(TPI表達(dá)盒)，并將各DNA序列分別克隆到質(zhì)粒pUC18的SacI/EcoRI、PstI位點(diǎn)、SalI/XbaI和XbaI/KpnI位點(diǎn)，得到整合型載體pNK1。
5.一種構(gòu)建權(quán)利要求1所述重組釀酒酵母的構(gòu)建方法，其特征在于：將權(quán)利要求1中的串聯(lián)rolGLP-1基因克隆到權(quán)利要求4中所構(gòu)建的整合載體pNK1中，得到表達(dá)載體pNK-GLP，再通過(guò)限制性內(nèi)切酶線性化pNK-GLP，并用線性化載體轉(zhuǎn)化釀酒酵母。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述，構(gòu)建表達(dá)rolGLP-1的重組酵母作為一種口服制劑用于預(yù)防和治療糖尿病。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述用途，用于糖尿病病人的治療方法，或者作為藥物組合物的一個(gè)組分。
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