[發(fā)明專利]一種用于制備人類疾病動(dòng)物模型的轉(zhuǎn)基因豬及其培育方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910066584.1
• 申請(qǐng)日: 2009-03-04
• 公開（公告）號(hào): CN101570763A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 歐陽洪生;逄大欣;陳立梅;李莉;李占軍;王鐵東;張明軍;任林柱;閆森;宋娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 陳宏偉

1、一種用于制備人類疾病動(dòng)物模型的轉(zhuǎn)基因豬，其特征在于：

由Mx1啟動(dòng)子啟動(dòng)Cre重組酶表達(dá)的轉(zhuǎn)基因豬，Cre重組酶可識(shí)別loxp位點(diǎn)從而敲除兩個(gè)loxp位點(diǎn)之間的基因。

2、權(quán)利要求1所述豬的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

采用基因工程的方法構(gòu)建誘導(dǎo)性表達(dá)Cre重組酶表達(dá)載體pET28a-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR，用干擾素誘導(dǎo)劑聚肌胞(polyI：C)進(jìn)行誘導(dǎo)后能夠表達(dá)Cre重組酶，從而用于敲除靶基因；

通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染及細(xì)胞篩選技術(shù)篩選出可以誘導(dǎo)性表達(dá)Cre重組酶的豬成纖維細(xì)胞；

利用體細(xì)胞核移植技術(shù)進(jìn)行克隆豬。

3、權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：

誘導(dǎo)性表達(dá)載體pET28a-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR以pGL3-Mx1載體為模板，通過PCR循環(huán)擴(kuò)增mx1啟動(dòng)子；

以PMD-Cre載體為模板，通過PCR循環(huán)擴(kuò)增Cre啟動(dòng)子；

以pcDNA3.1(+)載體為模板，通過PCR循環(huán)擴(kuò)增BGHpolyA；

從pGCFRT2NeoR載體上用Xho?I?and?Sal?I酶切得到FRT2NeoR盒子；

將所擴(kuò)增的片段和酶切回收片段，分別連入pET28a載體。