[發(fā)明專利]一種鑒定鰱魚幼苗性別的分子生物學方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910064285.4
• 申請日: 2009-02-27
• 公開（公告）號: CN101613750A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 常重杰;陳建軍;杜啟艷;夏曉華;王友利
• 申請（專利權(quán)）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 新鄉(xiāng)市平原專利有限責任公司
• 代理人: 毋致善

1.鰱魚DNA分子鑒定性別的核苷酸序列，其特征在于：該核苷酸序列為：

TGCAGGTCGACGATTTCCCAGCAGAGGTTATAAAAAAAAAAAAAAAAAAATGTTCACATGTTCTAATTATGTGTTTATTAGAGGTTGAATTCAAATCAAA TACTGCCAAACTGTCCATACTACTTCTGAATAGGATGTCTACCTCATAAAATGTATGAAAATATGGAAATGTATGGTTCAGATTACTCAAATAAATGG A G GCGCCCTTAAAGGGTCAGATATGGAGCTTGGGTGTCATCTAGTGAAAAAGTTTGGTACCTAAACAAAATCTTACTGAAAGGTAATTTTTGAAATAT TT CA AGCTAAAACTTGGAATGTTGAGATTTTTGGCTTTTATTTTCTTGCAGTTTAAGAGTAACACATGCTTTGTAATATATTATTATAAAATATAAAC AAT TAT ATTTGCACATTTTCATAACTTTTTTTTAAATTTCACTCTCATAATTTATTTCACTTCTACAATAATTTGACAAGTGGCTTCTTTAAAACATG ACCA ACCT TAGGTCTATATTCCAAAGCATTCTTGAATTACAACCATTTATGTTTGGATAGTGCATTTTCATGTCTACACAGTAAAATCGGCAGTGTTA ATTAG GCAGT GTTACTCTACATTTACTCTTAAGGAGTTAACTTAACAACAAATAGTGAAAGATACCCTCTAGTGTTGGTGAAAATTATCAGAGTTAAT TCTGCC TCGTTA ACTTTACTCTGTTAAGCTCCGCCCCTCAAGCTAACGACAAGGATCTGAACAGAAGTTTCTTGTCGTCGTTGCAACCGCCATTTTCT

2.鰱魚幼苗DNA分子鑒別的雄性特異引物，其特征在于：該雄性特異引物是由權(quán)利要求1所述的核苷酸序列設(shè)計合成的，該雄性特異引物的核苷酸序列為：

5’TGCAGGTCGACGATTTCCCAGC3’和

5’CCATTTTCTTTCACCTCGCACC?3’。

3.一種鑒定鰱魚幼苗性別的分子生物學方法，其特征在于：利用設(shè)計的雄性特異引物核苷酸序列：

5’TGCAGGTCGACGATTTCCCAGC3’和

5’CCATTTTCTTTCACCTCGCACC?3’，

以及對照管家基因GAPDH的引物核苷酸序列：

5’GCCTCCTGCACCACCAACTG3’和

5’CGGAAGGCCATGCCGGTCAG3’，以鰱魚個體基因組DNA為模板進行PCR擴增，反應(yīng)體系為25μl，反應(yīng)組成為1U的Taq?DNA聚合酶，2μl的dNTP，100～200ng基因組DNA，其中含雄性特異上下游引物及管家基因上下游引物各0.1μmol/L，在PCR儀上按下面的循環(huán)參數(shù)進行PCR擴增：95℃預(yù)變性5min后，94℃變性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸60sec共30個循環(huán)，最后72℃延伸10min，擴增產(chǎn)物以1.5％瓊脂糖凝膠電泳分離，溴化乙錠染色，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照記錄，100bp?DNA?ladder作分子量標記，該方法中對照管家基因GAPDH的擴增帶在雌雄個體中均穩(wěn)定存在，出現(xiàn)大小為800bp目的條帶的是雄性個體，沒有800bp目條帶的即為雌性個體。