[發明專利]集成柱色譜分離與純化黃姜中甾體皂甙的方法

無效

• 申請號: 200910062926.2
• 申請日: 2009-06-30
• 公開（公告）號: CN101607981A
• 公開（公告）日: 2009-12-23
• 發明（設計）人: 彭月娥;楊志華;王焰新
• 申請（專利權）人: 中國地質大學（武漢）
• 主分類號: C07J71/00
• 分類號: C07J71/00;C07J75/00;B01D15/08
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司
• 代理人: 唐萬榮

一.技術領域

本發明涉及一種用集成柱色譜技術分離與純化黃姜中的甾體皂甙方法。

二、背景技術

黃姜(Dioscorea?Zingiberensis?C.H.Wright)，學名盾葉薯蕷。上世紀九十年代，黃姜實現了野轉家人工栽培后，黃姜成為供應皂素生產的主要原料，黃姜皂素生產逐步發展成為了一個產業，并形成了從黃姜到甾體激素類藥物的一個龐大的產業鏈。皂素生產方法是將黃姜中的甾體皂甙(Steroidal?Saponins)通過化學或生物方法轉化為皂素后再通過有機溶劑將皂素提取出來[J.W.Rothrock，P.A.Hammes，W.J.Mcaleer.Isolation?of?diosgenin?by?acid?hydrolysis?of?saponin.Feberuary，49(2)：187-188]。

甾體皂甙除作為合成激素類藥物和避孕藥重要的原料外，同時還可用于治療冠心病心絞痛，抗腫瘤、抗癌、治療心血管疾病和白血病等作用[吳壽金，趙泰，秦永祺，現代中草藥成分化學，中國醫藥科技出版社，北京，2001：541][庾石山，皂苷，化學工業出版社，北京，2005：267]。

80年代，唐世蓉就從黃姜中分離了兩種水不溶性三糖皂甙和兩種水溶性四糖皂甙，其方法是：浸提-沉淀-活性炭脫色和重結晶精制，以及浸提-萃取-氧化鋁柱分離[唐世蓉，吳余芬，龐自潔，盾葉薯蕷甾體皂甙的分離鑒定，植物學報，1983，25(6)：556-562]。劉承來從黃姜中分離了三種甾體皂甙，其方法是：浸提-硅膠柱層析分離[劉承來，陳延鏞，唐易芳等，盾葉薯蕷中甾體皂甙的分離和鑒定，植物學報，1984，16(3)：283-289]，后又采用此方法從鮮黃姜中分離出了一種新四糖甾體皂甙[劉承來，陳延鏞，鮮盾葉薯蕷中原始皂甙的分離和鑒定，植物學報，1985，27(1)：8-74]。2006年，錢士輝等采用回流提取-硅膠柱層析的方法從黃姜中分離得到了5種甾體皂甙[錢士輝，袁麗紅，楊念云等，盾葉薯蕷中甾體類化合物的分離與結構鑒定，中藥材，2006.29(11)：1174-1176]。以上分離法都是采用傳統的浸提-開放柱層析來分離黃姜中的甾體皂甙，由于開放柱柱壓小，填料粒徑大，相對于高壓柱來說柱效要低很多，分離時間也較長，分離的皂甙純度不高，生物活性相對較低。

三.發明內容

本發明的目的提供一種集成柱色譜分離與純化黃姜中甾體皂甙的方法，分離的皂甙純度較高。

本發明提供的技術方案是：集成柱色譜分離與純化黃姜中甾體皂甙的方法，包括以下步驟：

(1)溶劑浸提

將過20目篩的黃姜干粉用體積百分比70-80％的乙醇浸提，提取液減壓濃縮，得浸膏；往浸膏中加1-5倍體積的水分散，靜置沉降后，離心分離，得離心液和固體兩部分；將固體50-70℃烘干后依次用石油醚、氯仿和甲醇回流提取；經甲醇回流提取物減壓濃縮至干，得粗甾體皂甙；

(2)集成柱色譜分離

a.開放柱分離

將粗甾體皂甙通過硅膠柱，用氯仿與甲醇體積比為10∶4的洗脫劑洗脫；取樣用A試劑顯色，若變黃色，則說明含有甾體皂甙；收集含甾體皂甙洗脫液，減壓濃縮至干，得濃縮物；

b.制備色譜分離純化

將步驟a中處理后得到濃縮物用甲醇溶解，經制備柱分離，制備柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)，分別收集10.9min、11.9min和12.8min流出液，凍干分別得到如下式所示的甾體皂甙A，B和C。

甾體皂甙A????????甾體皂甙B

甾體皂甙C

上述步驟(1)中的乙醇浸提次數為三次，每次浸提時間為3天，提取液為三次浸提的合并液。

上述步驟(2)a中的洗脫液采用A試劑顯色法檢測甾體皂甙，每收集25-50mL洗脫液檢測一次，甾體皂甙遇A試劑顯黃色。A試劑配制：0.5g香草醛溶于100mL硫酸乙醇溶液，其中硫酸(質量比為95-98％)與乙醇的體積比為4∶1。

上述步驟(2)b中采用的洗脫劑為甲醇和水體積比90∶10的洗脫劑，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為203m，進樣量為1mL，流速3.0ml/min。

本發明采用集成柱色譜技術，即將開放柱色譜和高壓制備柱色譜技術相結合，分離、純化黃姜中的甾體皂甙，分離時間短，分離的皂甙純度較高(可以使甾體皂甙的純度達到98％以上)，生物活性相對較高。

四.附圖說明

圖1為本發明開放柱分離皂甙薄層層析圖；

圖2為本發明皂甙A液相色譜圖；

圖3為本發明皂甙B液相色譜圖；