[發(fā)明專利]一種甲狀腺球蛋白和紅蕓豆植物紅血球凝集素快速聯(lián)合純化方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910059300.6
• 申請(qǐng)日: 2009-05-15
• 公開（公告）號(hào): CN101555277A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張濤;何濤;楊雨晗;劉樺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K14/42
• 分類號(hào): C07K14/42;C07K14/47;C07K1/14
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 李高峽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是一種使用共沉淀法從紅蕓豆中提取植物紅血球凝集素單 體，同時(shí)純化得到甲狀腺球蛋白的新技術(shù)，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甲狀腺球蛋白是一種糖蛋白，主要存在于哺乳動(dòng)物的甲狀腺組織中。由于 可以同凝集素或糖蛋白可逆結(jié)合.因此甲狀腺球蛋白在生物技術(shù)領(lǐng)域常常用作 配體偶聯(lián)到Sepharose?4B等載體，用于親和層析分離純化糖蛋白。甲狀腺球 蛋白分子量巨大(660kD)，目前文獻(xiàn)報(bào)道主要由分子篩方法純化。如：Nubuo U等(Nubuo?U.and?Osamu?T.，J?Biochem.1961，50(6)：508-518)和曾仲奎吳 洽慶等(曾仲奎吳洽慶，四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)1993)用硫酸銨和 分子篩的方法分離出甲狀腺球蛋白。這些方法耗時(shí)長，產(chǎn)率低，不適合工業(yè)化 大生產(chǎn)，因此，目前甲狀腺球蛋白市場價(jià)格昂貴。

植物凝集素(lectin)是植物細(xì)胞都能夠合成和分泌的、能與糖結(jié)合的蛋 白質(zhì)，在細(xì)胞識(shí)別和粘著反應(yīng)中起重要作用。凝集素具有一個(gè)以上同糖結(jié)合的 位點(diǎn)，因此能夠參與細(xì)胞的識(shí)別和粘著，將不同的細(xì)胞聯(lián)系起來，具有刺激外 周血淋巴細(xì)胞RNA合成和有絲分裂，促進(jìn)免疫反應(yīng)，使細(xì)胞凝聚，腫瘤細(xì)胞失 活，以及誘發(fā)人外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗癌淋巴因子等生物學(xué)活性。植物紅血球 凝集素(Phytohemagglutinin植物紅血球凝集素)是凝集素中的一種，具備 單一的凝血活性，能特異性的識(shí)別特殊糖鏈，因而在免疫診斷方面較凝集素更 具優(yōu)勢單體，純化的植物紅血球凝集素可作為糖專一性探針，研究癌變細(xì)胞膜 糖鏈結(jié)構(gòu)和細(xì)胞變異的工具，目前提取植物紅血球凝集素主要是從植物凝集素 中分離得到的，且是利用親和層析。如：Kimiko?ohtani等(Kimiko?ohtani，Satoaki shibata，Akira?misaki.Purfication?and?characterization?of Tora-bean(Phaseolusvulgaris)lectin[J].Biochem，1980，87：407-416)和丁邦裕等(丁 邦裕，戴美紅，余健.江蘇菜豆同工凝集素的分離純化及性質(zhì)研究.生物化學(xué)志 [J].1991，7(1)：25-27)利用鹽析和離子交換樹脂結(jié)合來進(jìn)行凝集素的純化， Tamao?Endo等(Tamao?Endo.Fractionation?of?glycoprotein-derived oligosaccharides?by?affinity?chromatography?using?immobilized?lectin?columns[J]. Journal?of?ChromatographyA，1996，720：251-26)和R.Reynoso-Camacho等 (R.Reynoso-Camacho，E.Gonzalez?de?Mejia，G.Loarca-Pina.Purification?and?acute toxicity?of?a?lectin?extracted?from?tepary?bean(Phaseolus?acutifolius)[J].Food?and Chemical?Toxicology，2003，41：21-27)利用親和層析純化凝集素。紅蕓豆紅細(xì)胞 凝集素單體的分離純化和性質(zhì)研究，成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008年6月”，其中 公開的紅血球凝集素單體的提取方法，具體方法為：制備植物凝集素初提取物， 再經(jīng)GM-Sepharose層析、DEAE-Sepharose層析、Sephadex?G?100層析，制備 植物凝集素單體；但是這些方法不能直接從原料中提取植物紅血球凝集素，而 且由于采用多步層析耗時(shí)長，生產(chǎn)成本高，不利于大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種通過共沉淀法從紅蕓豆中提取甲狀腺球 蛋白和紅蕓豆植物紅血球凝集素單體。

本發(fā)明提供了一種分離純化紅蕓豆植物紅血球凝集素和甲狀腺球蛋白的 方法，它是將紅蕓豆中提取物植物紅血球凝集素粗提液與甲狀腺球蛋白粗提液 混合，采用共沉淀法提取、純化、分離，得紅血球凝集素單體。

具體地，包括如下步驟：

a、制備紅蕓豆植物紅血球凝素粗提液；

b、制備甲狀腺球蛋白粗提液；

c、將紅蕓豆植物紅血球凝素粗提液與甲狀腺球蛋白粗提液按體積比為： 0.5∶1-2∶1混合，離心，取沉淀；