[發明專利]一種骨髓間充質干細胞向上皮細胞分化的誘導液及其制備和應用

有效

• 申請號: 200910059158.5
• 申請日: 2009-04-30
• 公開（公告）號: CN101875914A
• 公開（公告）日: 2010-11-03
• 發明（設計）人: 解慧琪;羅靜聰;楊志明
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 李高峽

技術領域

本發明涉及一種干細胞定向分化的上皮細胞誘導液，特別是涉及一種骨髓間充質干細胞向上皮細胞分化的誘導液及其制備和應用。

背景技術

上皮細胞是位于皮膚或腔道表層的細胞，具有分泌，排泄，保護和吸收等作用。由于上皮細胞的損傷或缺失而導致組織和器官的病變在臨床上多見，組織工程在構建這些組織和器官中具有積極作用。組織工程研究中，涉及到以上皮細胞為種子細胞構建的組織或器官時，往往會遇到上皮細胞體外培養擴增困難的問題，主要原因是可獲得的上皮來源少，細胞培養條件要求高且傳代困難。

骨髓間充質干細胞(bone?marrow?mesenchymal?stem?cells，BMSCs)在骨髓組織中含量最為豐富，它具有高度增殖，自我更新和多向分化潛能，不僅可以向骨，軟骨，脂肪，肌肉，肌腱和韌帶等多種間質組織分化，還能在一定的誘導條件下向神經元細胞，神經膠質細胞，血管內皮細胞，表皮干細胞，上皮細胞等分化，且免疫原性較弱和不存在倫理學等問題，來源廣，取材方便，是較理想的組織工程種子細胞。

目前國內外文獻已報道的將BMSCs體外誘導分化為上皮細胞的實驗并不多見，而此類實驗也多采用共培養或者在培養基中添加一些外源性因子進行誘導的方法，如：公告號為CN1766094名稱為“入骨髓間充質干細胞分化為表皮樣細胞的誘導液及其用途”的中國專利，公開了一種L-DMEM內含8-15ml/100ml胎牛血清、100U/ml青霉素、80U/ml鏈霉素、0.08-0.20mM氯化鈣、10-50ng/ml堿性成纖維生長因子、10-50ng/ml表皮生長因子、10-50ug/ml胰島素和5-20ug/ml維甲酸，用于誘導人骨髓間充質干細胞分化為表皮樣細胞；韓桂林，丁芳寶，梅舉，等.體外誘導犬骨髓間充質干細胞向上皮樣細胞分化的初步研究.第二軍醫大學學報.2006，27(8).-858-862，公開了一種K-SFM+EGF+BPE聯合培養液能夠在體外誘導犬BMSCs向上皮樣細胞分化；王素一，韓春茂，賴平平，岑航輝.人骨髓間質干細胞向表皮細胞分化的研究.中華燒傷雜志.2007，23(1).-66-68，公開了用普通L-DMEM培養基和含表皮生長因子、胰島素、維甲酸、氯化鈣的L-DMEM培養基誘導人骨髓間充質干細胞7d，含有表皮生長因子等外源性誘導因子的L-DMEM培養基可以將人骨髓MSC在體外可誘導分化為表皮細胞，等等。

還有一些文獻報道人骨髓間充質干細胞體外誘導分化為上皮細胞的報道，但是均為用含有表皮生長因子等外源性誘導因子的培養基誘導分化而來。

生長因子是一類通過與特異的、高親和的細胞膜受體結合，調節細胞生長與其他細胞功能等多效應的多肽類物質。由于人的器官分化是一個非常復雜的過程，人類的認識不可避免地具有局限性，雖然添加外源性生長因子可以誘導干細胞分化，但是也可能會因外源性生長因子干擾細胞、機體自身代謝調控，出現過度生長甚至形成腫瘤，如骨形態發生蛋白(bonemorphogenetic?protein，BMP)用于治療骨缺損，有文獻報道導致骨肉瘤形成。因此，添加外源性生長因子的方法存在誘導結果不確定和安全性的問題，極大地限制了其臨床應用。

而采用受損組織勻漿與骨髓間充質干細胞共培養方法誘導分化上皮細胞(Baer?PC.Bereiter-Hahn?J.Missler?C.Brzoska?M.Schubert?R.Gauer?S.Geiger?H.Conditioned?medium?from?renal?tubular?epithelial?cells?initiates?differentiation?ofhuman?mesenchymal?stem?cells.Cell?Proliferation.42(1)：29-37，2009以及Qian?H.Yang?H.Xu?W.Yan?Y.et?al.Bone?marrow?mesenchymal?stem?cells?ameliorate?ratacute?renal?failure?by?differentiation?into?renal?tubular?epithelial-like?cells.International?Journal?of?Molecular?Medicine.22(3)：325-32，2008)對獲得足量的可用于臨床修復的種子細胞也是一種極大的限制。