[發(fā)明專利]一種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向上皮細(xì)胞分化的誘導(dǎo)液及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910059158.5
• 申請(qǐng)日: 2009-04-30
• 公開（公告）號(hào): CN101875914A
• 公開（公告）日: 2010-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 解慧琪;羅靜聰;楊志明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/06
• 分類號(hào): C12N5/06
• 代理公司: 北京律誠(chéng)同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 李高峽

1.一種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液，其特征在于：其由上皮細(xì)胞培養(yǎng)液與L-DMEM以2∶1～1∶2的體積比混合而成，內(nèi)含6％v/v胎牛血清。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液，其特征在于：所述的上皮細(xì)胞為口腔粘膜上皮細(xì)胞，上皮細(xì)胞培養(yǎng)液與L-DMEM的體積比為1∶1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液，其特征在于：其蛋白濃度為1500～2500μg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一一項(xiàng)所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液，其特征在于：所述的上皮細(xì)胞培養(yǎng)液由以下方法制備：

a、將口腔粘膜上皮細(xì)胞接種于DK-SFM中培養(yǎng)，接種濃度1×10⁵個(gè)/cm²種于25cm²培養(yǎng)瓶中，于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24±6小時(shí)，換液，吸棄未貼壁細(xì)胞及培養(yǎng)液，更換新鮮培養(yǎng)液；

b、首次換液后，每隔2d收集一次上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，并更換新鮮培養(yǎng)液；

c、混合收集到的上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，即得。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液，其特征在于：所述的上皮細(xì)胞培養(yǎng)液由1～3代上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中收集的培養(yǎng)液混合而成。

6.制備權(quán)利要求1所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液的方法，包括：

①制備上皮細(xì)胞培養(yǎng)液：

a、將口腔粘膜上皮細(xì)胞接種于DK-SFM中培養(yǎng)，接種濃度1×10⁵個(gè)/cm²種于25cm²培養(yǎng)瓶中，于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24±6小時(shí)，換液，吸棄未貼壁細(xì)胞及培養(yǎng)液，更換新鮮培養(yǎng)液；

b、首次換液后，每隔2d收集一次上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，并更換新鮮培養(yǎng)液；

c、混合收集到的上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，備用；

②將上皮細(xì)胞培養(yǎng)液與L-DMEM以2∶1～1∶2的體積比混合，并加入胎牛血清，使混合液含6％v/v胎牛血清，即得。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液的制備方法，其特征是：步驟①所述的上皮細(xì)胞培養(yǎng)液由1～3代上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中收集的培養(yǎng)液混合而成；步驟②中，上皮細(xì)胞培養(yǎng)液與L-DMEM體積比為1∶1，所得到的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液蛋白濃度為1500～2500μg/ml。

8.一種由骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化制備上皮細(xì)胞的方法，包括：

a)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)；

b)制備權(quán)利要求1所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液；

c)取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，用消化液在室溫下消化、傳代，加入b)步驟制備的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液培養(yǎng)，每2天用上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液半量換液，誘導(dǎo)培養(yǎng)21天后，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為上皮細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：步驟c)所述的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為第2代～第5代任意一代干細(xì)胞。

10.權(quán)利要求1所述的上皮細(xì)胞誘導(dǎo)液在體外定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向上皮細(xì)胞分化的應(yīng)用。